【2017年整理】实验一特殊显微镜及其使用.pptVIP

细胞生物学实验;本实验课共36学时，由12个实验组成。;实验内容;实验要求;实验一 特殊显微镜及流式细胞仪的使用;1、口腔上皮细胞 2、活细胞（细胞系） 3、培养的紫菜或小新月菱形藻 4、流式细胞仪的演示;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜;实验目的： 掌握暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜及流式细胞仪的原理、构造及其使用方法。 学习特殊显微镜操作的目的： 暗视野显微镜：看到运动的物体，利用目标物体的轮廓与背景区分开 荧光显微镜：辨别含有荧光物质所在的位置;一、 暗视野显微镜;1. 原理 利用暗视野聚光器（或挡板）使入射光束的中央光束被阻挡．不能由下而上地通过标本进入物镜，只能倾斜地照射在观察的标本上。标本遇光发生反射或散射，物镜接触不到入射光源的光线，只能接触标本的反射和散射光。因而整个视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的，使在黑暗的背景上呈现出明亮的像。;2.操作方法（P14）;注意事项;用途：;3. 实验内容、材料与仪器;二、相差显微镜;相差：同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。;相差显微镜与普通显微镜的主要不同之处是： 1）用环状光阑代替可变光阑 2）用相差物镜(通常标有PH的标记)代替普通物镜； 3）带有一个合轴调中望远镜CT: 用于环状光阑的环孔与相差物镜相板共轭面的环孔（暗环）在光路中准确合轴，使成像的相位差变为振幅差； 4）有绿色滤色片：用于消色，可吸收红色和蓝色光，只透过绿光，使波长范围小的单色光线进行照明，并有吸热作用，能使相差观察获得良好的效果;1. 灯箱 2. 滤色片座 3. 相衬环杆 4. 相衬环调节螺钉 5. 目镜 6. 三目头 7.手轮松紧张力圈 8. 粗动调焦手轮 9. 电源插头 10. 电源插座 11. 微动调焦手轮 12. 物镜 13. 载物台 14. 聚光镜调节螺钉 15. 聚光镜托架 16. 孔径光栏调节转环 17. 灯座调节螺钉;18. 视场光栏调节手柄 19. 聚光镜固紧螺钉 ? 20. 聚光镜升降手轮 ? 21. 移动工作台 ???? 22. 纵向移动手轮 23. 横向移动手轮 24. 电源开关 25. 亮度调节旋钮 26. 移动机构固紧螺钉 27. 升降限位固紧手柄 28. 镜筒固紧螺钉 29. 观察摄像拉杆 30. 集光镜调节手柄 31.聚光镜刻度处 ;3 使用方法： ;4 用途： 用于观察组织培养中活细胞形态结构或未染色标本。 5、标本 活细胞 ; 荧光显微镜是利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光3650入或紫蓝光4200入)作为激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的可见荧光，再通过物镜和目镜的成像、放大，以供检视和拍摄。; 当一个物体吸收了紫外光或者短波光的能量，它能发射出比原来吸收的波长更长的光。这种波长长于激发光的可见光称为“荧光” 。;自发荧光（不加染色）：有些物质不加染色，也能发出荧光（自发荧光或原发荧光），但在医学和生物学领域中，只有很少物质具有自发荧光。 二次荧光（用化学染色）：非荧光性的物质（蛋白质、碳水化合物）用荧光色素染色，由荧光色素产生荧光（二次荧光），以便进行观察。对特定物体选择合适的荧光色素，该物体就能和周围的组织或细胞区别出来而可以观察到。 抗体荧光技术（用免疫染色）：利用特定的抗原必然和特定的抗体相结合这一个事实，有意识地使带荧光标记的抗体和标本中的抗原进行抗原/抗体反应，这样两者的结合体就能通过抗体的荧光观察到。;Evaluation only. Created with Aspose.Slides for .NET 3.5 Client Profile 5.2.0.0. Copyright 2004-2011 Aspose Pty Ltd.;普通光学显微镜加附件： 1)荧光光源 2)激发滤片 3)双色束分离器 4)阻断滤片等 的基础上组成的。;荧光显微镜内部构造（反射式）; ;激发滤色镜(exciter filter);阻断滤光镜(barrier filter)： ;2.4、荧光显微镜的光路;透射荧光显微镜光路图;反射荧光显微镜光路图; ;缺点： ;3.2.反射荧光显微镜： ;优点： ;1）打开灯源开关（汞灯及普通灯光源），超高压汞灯要预热几分钟才能达到最亮点。 2）反射式荧光显微镜需在光路的插