实验二 大菌群的检验.ppt

大肠菌群的定义;大肠杆菌的定义;大肠菌群和大肠杆菌的关系;卫生学意义;大肠杆菌的生物学特性;大肠杆菌的生物学特性;大肠菌群及大肠杆菌测定 ——MPN法检验流程（FDA BAM）;大肠菌群测定——MPN法检验几点说明;大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别;大肠杆菌测定——EMB选择性分离鉴别;大肠杆菌测定——革兰氏染色;大肠杆菌测定——革兰氏染色;大肠杆菌测定——生化鉴定;实验二大肠菌群的检验 一、实验目的 1、学习食品中大肠菌群检测程序、方法； 2、掌握食品中大肠菌群检测结果的报告方式。 二、实验材料 1、设备和材料 温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、平皿、试管、发酵管、吸管、载玻片、接种针 2、培养基及试剂 乳糖—胆盐发酵管、乳糖发酵管、蛋白胨水、靛基质试剂、麦康凯、伊红美蓝琼脂（EMB）、革兰氏染色液;GB4789.3-2010 大肠菌群计数;GB4789.3-2010 大肠菌群计数;啥交责震拣腮枉烈提磕生籽溅胯湛途九丫娩裳闲存郡裙厂顺浪培龟振涟札实验二 大菌群的检验实验二 大菌群的检验;（一）最先准备的器材;（三）应制备的培养基; 蛋白胨20g、胆盐5g、乳糖10g、0.4%溴甲酚紫乙醇溶液25ml、蒸馏水1000ml（将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于水中，校正PH值至7.4，加入指示剂）；或购买制好的乳糖胆盐发酵培养基、按说明配置。分装试管，每管10ml，并放入一个到气管（杜氏小管），高压灭菌115℃、15分钟。 双料乳糖胆盐发酵培养基除蒸馏水外，其它成分加倍。 ;A.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤 A.1.1 成分 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 氯化钠 5.0 g 乳糖 5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4） 2.75 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 2.75 g 月桂基硫酸钠 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL pH 6.8±0.2 A.1.2 制法 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。;A.2 煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤 A.2.1 成分 蛋白胨 10.0 g 乳糖 10.0 g 牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液 200 mL 0.1%煌绿水溶液 13.3 mL 蒸馏水 800 mL pH 7.2±0.1 A.2.2 制法 将蛋白胨、乳糖溶于约500 mL蒸馏水中，加入牛胆粉溶液200 mL（将20.0 g脱水牛胆粉溶于200 mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975 mL，调节pH，再加入0.1%煌绿水溶液13.3 mL，用蒸馏水补足到1 000 mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10 mL。121 ℃高压灭菌15 min。;A.3 结晶紫中性红胆盐琼脂（VRBA） A.3.1 成分 蛋白胨 7.0 g 酵母膏 3.0 g 乳糖 10.0 g 氯化钠 5.0 g 胆盐或3号胆盐 1.5 g 中性红 0.03 g 结晶紫 0.002 g 琼脂 15 g～18 g 蒸馏水 1 000 mL pH 7.4±0.1; 蛋白胨　　　　　　 10.0g 　　乳糖 　　　　　　　10.0g 　　磷酸氢二钾 2.0g 　　琼脂　　　　　　 15.0g　　伊红γ 0.4g　　美蓝　　　　　　　0.065g  或20ml 伊红γ (20g /L)和 10ml 美蓝(6.5 g /L) 　　 蒸馏水　　　　　 1000.0mL　　最终pH7.1±0.2 (25℃) 先将蒸馏水中加入磷酸氢二钾及蛋白胨、乳糖使之溶解，后加琼脂加热溶解，再调pH=7.2-7.4,再加入伊红,美蓝水溶液, 高压灭菌115℃、15分钟。 蛋白胨提供细菌生长发育所需的氮源、维生素和氨基酸，乳糖提供发酵所需的碳源，磷酸氢二钾维持缓冲体系，伊红Y和美蓝抑制绝大部分革兰氏阳性菌的生长。琼脂是凝固剂。 大肠杆菌在EMB上发酵乳糖，形成黑色菌落，大部分有金属光泽。沙门氏菌形成无色菌落。金黄色葡萄球菌基本上不生长。 ;质控：