第十九章 平面色谱法.ppt

1.定性分析 比较Rf值或Rr值 、斑点颜色或荧光 常采用已知标准物质对照（同一板上展开） 多种展开系统的Rf值与对照品一致。 2.定量分析　 　洗脱法 　直接定量法 　　（1）目视比较法（如杂质限度检查方法） 　　（2）薄层扫描法 （四）定性和定量分析 薄层扫描法 用一定波长的光束照射展开后的薄层板，测定薄层色谱斑点的吸光度A（或荧光强度F）随展开距离a的变化，所记录的A-a（或F-a）曲线称为薄层色谱扫描图，利用薄层扫描图进行定量及定性分析的方法成为薄层扫描法。 薄层扫描法 薄层吸收扫描法 薄层荧光扫描法 透过法与反射法 单波长法和双波长法　 单波长法与双波长法 常采用双波长法　λs 选用被测组分的最大吸收波长，λR选用不被被测组分吸收的波长（薄层板的空白吸收）。由于从测量值中减去了薄层本身的空白吸收，所以在一定程度上消除了薄层不均匀的影响，使测定结果准确度提高。 图16-10 双波长双光束薄层扫描仪 图16-11 双波长测定法 L：光源 MC：单色器 CH：斩光器 ①、②为单波长扫描曲线 P：薄板 PM：光电检测器 ③为双波长扫描曲线 扫描方式 线形扫描　快速，但在斑点不规则和浓度不均匀时测量误差较大。 曲折形扫描　适用于形状不规则及浓度分布不均匀的斑点。 薄层色谱的应用 广泛应用于各种天然和合成有机物的分离和鉴定，有时也可用于小量物质的精制。 药品质量监控，可用于测定药物的纯度和检查降解产物。 在生产上可用于判断反应终点，监视反应过程。 对中药和中成药，薄层色谱鉴别应用广泛，可鉴别有效成分，进一步进行含量测定。 （一）纸色谱法的分离原理 纸纤维为载体，吸着在其上的水为固定相 属于正相分配色谱 依据分配系数的不同而达到分离 极性或亲水性强的组分，K大，Rf值小，极性弱或亲脂性强的组分，K小，Rf值大。 四、纸色谱法 （二）纸色谱法的实验条件 色谱纸的选择 对Rf值相差很小的化合物，宜采用慢速滤纸 对Rf值相差较大的化合物，则可用快速滤纸 固定相　 水或甲酰胺、二甲基甲酰胺、丙二醇或缓冲溶液。 展开剂的选择　增加展开剂中极性溶剂的比例量，可以增大Rf值；增加展开剂中非极性溶剂的比例量，可以减少Rf值。 常用的展开剂　水饱和的有机溶剂，如水饱和的正丁醇、正戊醇、酚等 操作步骤 　点样、展开、显色、定性定量分析 （二）纸色谱法的实验条件 小 结 比移值及其与K和k的关系、相对比移值 吸附薄层色谱法：原理，吸附剂、展开剂及其选择 薄层色谱定性方法 纸色谱法：原理和实验条件 色谱类型 分离原理 载体 固定相 流动相 Rf顺序 吸附薄层色谱 吸附 ? 硅胶 有机溶剂 极性小的Rf值大 正相薄层色谱 分配 硅胶 水 有机溶剂 极性小的Rf值大 反相薄层色谱 分配 硅胶 硅胶键合相 水-有机溶剂 极性小的Rf值小 纸色谱 分配 滤纸 水 水-有机溶剂 极性小的Rf值大 主要平面色谱类型 仪器分析 第十九章 平面色谱法 一、概述 二、平面色谱法的分类和原理 三、薄层色谱法 四、纸色谱法 特点： 方便、快速、成本较低，易于推广 样品的预处理比较简单 应用范围广 展开剂选择范围宽 一、概述 在平面上进行分离的一种色谱方法，主要包括薄层色谱法和纸色谱法。 历史简介 1938年，俄国人Izmailov和Shraiber首先实现了在氧化铝薄膜上分离一种天然产物。 1949年，两位美国化学家报导了用薄层色谱法成功地分离了精油中的萜烯。 1958年，德国化学家Stahl系统描述了用作涂布薄层的材料（薄层色谱固定相）和涂板设备，对薄层色谱技术也进行了规范化描述。 Stahl于1965年出版了《薄层色谱法》一书。 20世纪80年代 出现了仪器化薄层色谱法，薄层色谱的每一步均用仪器来代替以往的手工操作，再配以薄层扫描仪，这样就使薄层色谱法的定量结果的重现性和准确性大大提高。 高效液相色谱法 薄层色谱法 固定相 封在色谱柱内 均匀涂在载板上 样品预处理 要求严格 较不重要，节省时间、溶剂和材料 进样 直接引入流动相，每次一个样 点在固定相上，可同时点几个 色谱分离 通过改变流动相比例来改善分离 恒组分流动相、梯度洗脱 反相色谱占主导地位 可采用不同溶剂系统进 行同向或双向多次展开 正相色谱占主导地位 检测 最常用：UV 最常用：UV 定性 Rt Rf 定量 符合L-B定律 不符合L-B定律 二、平面色谱法的分类和原理 分类 　　薄层色谱法： 吸附薄层色谱法 分配薄层色谱法 分子排阻薄层色谱法 　　纸色谱法:分配 　　薄层电泳法 最佳范围