BRCA1蛋白在胰腺癌组织中的分布和表达论文.docVIP

　　BRCA1蛋白在胰腺癌组织中的分布和表达论文 王春杨，张金山，张远强，孙圣坤，蔡伟， 高江平，洪宝发，王晓雄 .freelent of cancer. METHODS： Using the human breast cancer cell line MCF7 as positive control, the subcellular distribution of BRCA1 munofluorescence staining and immunohistochemistry. RESULTS： BRCA1 munofluorescence staining revealed that the interaction of BRCA1 protein bet and nucleus stimulated BRCA1 nuclear export ic shuttling manner ent. CONCLUSION: Distribution of BRCA1 in plasm and nucleus of pancreatic cancer cells indicates that it may be involved in protein function regulation of pacreatic cancer tissue, possess the characters of proteins related to cancer development, and bee a better biological target for the clincal therapy of pancreatic cancer. 【Keys; BRCA1; tissues; nuclear export 0引言 近年来研究表明，BRCA1的背景是乳腺癌相关蛋白，其基因是肿瘤抑制基因之一. BRCA1蛋白由1863个氨基酸组成，有N端、C端和中间ATM, ATR的磷酸化区组成. 如果有BRCA1基因突变的患者直到70岁前其乳腺癌的发病率85%左右，这比普通人群远远高出20倍. 许多高度散发型乳腺癌和卵巢癌的病例也有BRCA1蛋白表达明显降低的现象，许多研究已经提示了其在散发型乳腺癌和卵巢癌中的重要作用［1］ ；但BRCA1在胰腺癌组织的分布及其作用近年鲜有报道. 很多证据证实BRCA1 在许多细胞过程中是非常必须的：如DNA 修复, 细胞周期，checkpoint control, 转录调节和凋亡，直到染色体重建［2-5］, 但是其肿瘤抑制功能中的作用机制有待进一步研究，尤其是在胰腺肿瘤等与激素有关的肿瘤中BRCA1特性蛋白和导致肿瘤发生的原因需要进一步研究，我们对BRCA1蛋白在胰腺癌的分布和特性以及可能有关机制进行了研究和讨论. 1材料和方法 1.1材料 解放军总医院确诊胰腺癌病例石蜡包埋标本20例，第四军医大学组胚教研室胰腺癌病例石蜡包埋存档标本15例. 荧光显微镜（Olympus BX60），小鼠抗人BRCA1 mAb（molecular probes）, FITC标记的和AvidinTexas red 标记的第2抗体（山羊抗小鼠IgG，molecular probe公司）和苏木精和伊红（HE）染料. 1.2方法 1.2.1组织切片制备胰腺癌组织切成4 mm×5 mm的方块，经40 g/L多聚甲醛固定(含苦味酸)后梯度脱水、浸蜡过夜高温包埋. 石蜡切片机进行切片，成5 μm石蜡切片，经贴片、脱蜡、复水等过程后准备做抗体染色或HE染色. 1.2.2免疫荧光双重染色和免疫荧光显微镜观察细胞阳性对照操作：消毒无菌的盖玻片无菌操作在洁净台下用镊子放在6孔板中，2.5 g/L的胰酶消化后的MCF7用DMEM培养液悬浮后分装到6孔板中，每孔细胞数量2×105，细胞贴壁后24 h置入-20℃, 700 mL/L乙醇中固定10 min，pH值7.2~7.4的0.01 mol/L PBS冲洗充分后与准备好的组织切片成套以20 mL/L BSA封闭1 h，浸润BRCA1第一抗体（稀释比例1∶100，molecular probes）4℃过夜. 第二抗体FITC羊抗小鼠（稀释比例1∶400，molecular probes）或者第二抗体AvidinTexas red 山羊抗小鼠（稀释比例1∶400，molecular probes）室温摇动充分浸润4 h. pH值7.2~7.4的0.01 mol/L PBS冲洗3遍，最后以DAPI复染10 min，荧光封片剂封片（vector）待观察计数。每组实验重复进行3次. 显微镜观察时每个病例取5组切片，每张切片读取10个高倍视野约500个肿瘤细胞. 1.2.3HE染