XPA基因多态性与食管癌、贲门癌发病风险的关联论文.docVIP

　　XPA基因多态性与食管癌、贲门癌发病风险的关联论文 【摘要】 目的 探讨XPA基因5’非编码区转录启始密码子ATG上游第4位 A23G和228密码子G709A单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphism，SNP）与河北省食管癌、贲门癌高发区—磁县和涉县人群食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)和贲门腺癌(Gastric cardiac adenocarcinoma, GCA)遗传易感性的关系。方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCRRFLP)分析方法检测327名ESCC患者、253名GCA患者和612名健康对照的XPA A23G 和G709A SNP的基因型。结果 XPA基因A23G的等位基因和基因型频率在ESCC和健康对照之间,总体分布有显著性差异。与A/A基因型相比, A/G+G/G基因型可显著降低ESCC的发病风险。分层分析显示，此保护作用在非吸烟组和吸烟组人群中尤为明显。此保护作用在UGIC家族史阴性人群中也很明显。在GCA和健康对照之间,A23G等位基因频率和基因型频率总体分布无显著性差异（P 0.05）。与A/A基因型相比, A/G+G/G基因型可显著降低GCA的发病风险。分层分析显示, 在非吸烟组中, GCA患者组和健康对照之间，基因型频率分布有显著性差异（P＜0.05）。与A/A基因型相比， A/G+G/G基因型可显著降低非吸烟人群GCA的发病风险。结论 XPA基因A23G 含突变等位基因（G）的基因型（A/G+G/G）可能是影响河北省食管癌、贲门癌的高发区——磁县和涉县人群ESCC发病风险的因素之一。 【关键词】 食管鳞状细胞癌 贲门腺癌 XPA 基因多态性 机体的DNA修复系统在维持基因组功能的整体性以及修复致癌因素所致的损伤中起重要作用1 。DNA 修复能力（DNA repair capacity, DRC）低下与癌症风险增高相关2。核苷酸切除修复（Nucleotide eacision repair, NER）是人类最主要和最灵活的的DNA损伤修复途径。 XPA是一种进化保守的DNA修复酶，在核苷酸切除修复通路中，它与RPA3、XPC、TFIIH、XPG、ERCC1XPF复合体及DNA聚合酶一起共同作用,完成DNA的修复4 。XPA多态性的改变可能会影响其蛋白质的功能进而改变个体DNA的损伤修复能力。XPA多态性与肺癌相关研究已有报道5,6。但有关XPA多态性与食管癌和贲门癌关系的研究尚未见报道。 本研究应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(Polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism,.freelous cell carcinoma.freela，GCA)患者均来自河北省食管癌、贲门癌高发区磁县和涉县，612名健康对照为在相同地区相同时间体检为正常人群，并经本人知情同意，由专门的登记员调查所有研究对象的性别、年龄、吸烟史及上消化道肿瘤家族史。现吸烟或曾吸烟每天5支以上并持续两年或两年以上者定义为吸烟个体。家族中有1名以上一级亲属和(或)2名以上二级亲属患有食管癌/贲门癌/胃癌者定义为上消化道肿瘤（Upper gastrointestinal cancer, UGIC）家族史阳性。 1.2 标本采集及外周血白细胞DNA的提取 所有研究个体均采集静脉血5ml，经枸橼酸钠抗凝，4℃冰箱保存。采血后一周内，以蛋白酶K消化饱和氯化钠盐析法，提取外周血淋巴细胞染色体DNA。 1.3 XPA SNP 基因分型 XPA A23G基因型检测应用PCRRFLP方法进行。XPA基因A23G的 PCR反应体系为20μl，其中模板DNA 100ng，10×PCR缓冲液（MgCl2free）2μl， MgCl2 2.5mM，Taq DNA聚合酶（赛百胜公司，北京）2.0U，dNTPs 200μM，上游引物5’TTAACTGCGCAGGCGCTCTCACTC3’和下游引物5’AAAGCCCCGTCGGC CGCCGCCAT3’各200nM。PCR反应条件为：94℃预变性5min后， 94℃变性30s、58℃退火20s、72℃延伸20s，35个循环后，72℃继续延伸7min。PCR产物经限制性内切酶MspI（宝生物公司，大连）于37℃酶切16h后，进行4%琼脂糖凝胶电泳。A/A基因型由于缺乏MspI的识别位点保持原有PCR后的158bp的片段，而G/G基因型存在MspI的识别位点产生130和28bp两条DNA片段，A/G基因型则表现为158bp、130bp和28bp三条片段，见图1。 1: G/G ge