第十四章基因重和基因工程.docVIP

第 十 四 章 基因重组和基因工程 Genetic Recombination and Genetic Engineering 一、DNA的重组(DNA recombination)：DNA重组的类型：接合(conjugation)、转化(transformation)和转导(transduction)的基本概念；特异位点重组(site-specigic recombination)和转座重组(transposition)。2学时 二、重组DNA技术：DNA克隆(DNA cloning)、工具酶、目的基因(target DNA)、基因载体(cloning vector)；重组DNA技术基本原理及操作步骤。3学时 三、简介重组DNA技术与医学的关系。1学时 总学时：6学时 一、DNA的重组 （DNA Recombination） DNA重组的类型：同源重组 (homologous recombination)、接合(conjugation)、转化(transformation)、转导(transduction)特异位点重组(site-specigic recombination)和转座重组(transposition)。 （一）同源重组 发生在同源序列间的重组称为同源重组(homologous recombination)，又称基本重组。是最基本的DNA重组方式，通过链的断裂和再连接，在两个DNA分子同源序列间进行单链或双链片段的交换。Homologous recombination（同源重组）: Recombination between two DNA molecules of similar sequence, occurring in all cells. 以E.coli的同源重组为例，了解同源重组机制的Holliday模型。Holliday模型中，同源重组主要4个关键步骤： 1．两个同源染色体DNA排列整齐 2．一个DNA的一条链断裂、并与另一个DNA对应的链连接，形成Holliday中间体 3．通过分支移动产生异源双链DNA 4．Holliday中间体切开并修复，形成两个双链重组体DNA，分别为： 片段重组体(patch recombinant)：切开的链与原来断裂的是同一条链，重组体含有一段异源双链区，其两侧来自同一亲本DNA。 拼接重组体(splice recombinant)：切开的链并非原来断裂的链，重组体异源双链区的两侧来自不同亲本DNA。 （二）细菌的基因转移与重组 1．接合作用：当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时，质粒DNA从一个细胞（细菌）转移至另一细胞（细菌）的DNA转移称为接合作用(conjugation)。 2．转化作用：通过自动获取或人为地供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，称为转化作用 (transformation)。 Transformation: Introduction of an exogenous DNA into a cell, causing the cell to acquire a new phenotype. 3．转导作用：当病毒从被感染的（供体）细胞释放出来、再次感染另一（供体）细胞时，发生在供体细胞与受体细胞之间的DNA转移及基因重组即为转导作用(transduction)。 Transduction: The transfer of genetic information from one cell to another by means of a viral vector. （三）位点特异重组 位点特异重组(site-specific recombination) 是由整合酶催化，在两个DNA序列的特异位点间发生的整合。 Site-specific recombination: A type of genetic recombination that occurs only at specific sequences. （四）转座重组：由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为转座(transposition)。 Transposition: The movement of a gene or set of genes from one site in the genome to another. 1．插入序列转座： 插入序列(insertion sequences, IS)组成：二个分离的反向重复(inverted repeats, IR)序列，特有的正向重复序列。 发生形式：保守性转座(conservative transposition) 复制性转座(duplicative transposition) 2．