不同刺激剂和培养环境对CD4+ 、 CD8+ T细胞内细胞因子表达的影响论文.docVIP

　　不同刺激剂和培养环境对CD4+ 、 CD8+ T细胞内细胞因子表达的影响论文 .freeluli under different culture conditions Abstract AIM: To investigate the effect of different stimuli and different culture conditions on the cytokine expression of CD4+ and CD8+ T cells. METHODS: PBMCs normal human peripheral blood and cultured uli (PHA, antiCD3 and antiCD28 mAbs, PMA and ionomycin) under four different culture conditions (room temperature, 37℃ L/L CO2 incubator) for 4.5~5 h and intracellular cytokines (IL2, IFNγ and TNFα) in T cells etry (FCM). RESULTS: Cytokine expression of CD4+ and CD8+ T cells varied uli under different conditions. PMA had the strongest stimulative effect on cytokine expression of PBMC, Ab temperature. CONCLUSION: AntiCD3 and antiCD28 mAbs,.freelycin are remended for the stimulation of PBMCs and detection of intracellular cytokine using FCM. Culture temperature but not the concentration of CO2 is the most important factor during the short term T cell stimulation. Keyetry; T cell subset; cytokine; stimulus; culture condition 摘 要 目的: 探讨不同的刺激剂和不同的培养条件对CD4+和CD8+ T细胞内细胞因子表达的影响。方法: 分离正常人的外周血单个核细胞（PBMC）, 分别加入3种不同的刺激剂（PHA, 抗CD3和抗CD28 mAb, PMA和离子霉素）, 置于4种不同的培养环境下（室温, 37℃水浴, 37℃培养箱, 37℃ 50 mL/L CO2培养箱）培养45~5 h。收集细胞, 以荧光素mAb标记后, 用流式细胞术分析CD4+、 CD8+ T细胞内IL2、 IFNγ和TNFα的表达。结果: CD4+和CD8+ T细胞内细胞因子的表达, 随着刺激剂的不同而有所差别, 且在上述4种培养环境中, PMA的刺激效果最强, 抗CD3 mAb次之, PHA的刺激效应最弱。以上述3种刺激剂刺激后, 不同培养条件对T细胞内细胞因子的表达有一定的影响。室温培养时几乎检测不到细胞因子的表达, 而在37℃水浴、 37℃培养箱和37℃ 50 mL/L CO2培养箱中培养时, 表达细胞因子的CD4+和CD8+ T细胞的百分率差异无统计学意义（P 0.05）。结论: 不同刺激剂体外刺激T细胞表达细胞因子的效应不同,依次为PMA和离子霉素 抗CD3和抗CD28 mAb PHA。体外刺激培养的T细胞活化过程中, 温度是重要的条件, CO2无明显影响。 关键词流式细胞术; T细胞亚群; 细胞因子; 刺激剂; 培养条件 应用荧光素标记的抗细胞表面抗原的单克隆抗体（mAb）和抗细胞因子的mAb, 流式细胞术不仅可检测单个细胞内的多种细胞因子, 还可区分表达特定细胞因子的细胞亚群1。但该技术涉及的环节较多, 因此, 需对各方面的影响因素进行探讨。我们曾分析了刺激时间和固定破膜剂等因素对该方法的影响2, 但对于不同刺激剂和不同培养环境对细胞内细胞因子表达的影响尚未见报道。为此, 本研究中分析了3种刺激剂（PHA, 抗CD3和抗CD28 mAb, PMA和离子霉素）以及4种培养环境（室温, 37℃水浴, 37℃培养, 37℃ 50 mL/L CO2条件下培养）对CD4+和CD8+ T细胞内细胞因子表达的影响。本研究可为在没有CO2培养箱的条件下, 用流式细胞术检测细胞表面和细胞内的细胞因子提供实验依据, 同时为流式细胞术检测的标准化奠定了基础。 1 材料