高效液相色谱-02剖析.pptVIP

第七章高效液相色谱分析法;7.1HPLC的分类与基本原理;按固定 相分类;详细分类图;7.3 各类高效液相色谱法7.3.1 吸附色谱法 LSC;液-固吸附色谱liquid-solid adsorption chromatography;7.3 各类高效液相色谱法7.3.2 分配色谱法(LLC);液-液分配色谱liquid- liquid partition chromatography;7.3.3离子交换色谱ion-exchange chromatography;7.3.4 离子色谱ion chromatography;7.3.5排阻色谱色谱size- exclusion chromatography;7.3.6 亲和色谱(AC) Affinity chromatograph;7.3.7 化学键合色谱法;反相键合相色谱法，RBPC 正相键合色谱法， NBPC 离子对色谱法，IPC or. PIC 离子抑制色谱法，ISC 其他色谱法;反相键合相色谱法 RBPC 典型的反相键合色谱法(RBPC)，是用非极性的键合固定相和极性流动相组成的色谱体系。固定相常用十八烷基硅烷键合相(ODS或C18)；流动相常用甲醇－水、乙腈－水。 非典型反相键合色谱系统，用弱极性或中等极性键合相与极性大于固定相的流动相组成。; 7.3.7 化学键合色谱法1.反相键合相色谱法;7.3.7 化学键合色谱法1.反相键合相色谱法;7.3.7 化学键合色谱法1.反相键合相色谱法;正相键合色谱法(NBPC)：固定相一般以氰基或氨基等极性基团作为键合相；流动相以烷烃(正己烷)中加入适量的极性调整剂(如氯仿、甲醇、乙腈等)为流动相。用途主要用于分离极性不同的化合物、异构体，特别适用于分离不同类型的化合物。 ⑴ 分离机理　主要靠组分分子与固定相之间的范德华力、氢键作用力的差别而进行分离。 ⑵ 流动相的极性与容量因子的关系 　 作正相洗脱时，流动相的极性增大，洗脱能力增加，k减小， tR减小；反之，k 与tR增大。分离结构相近的组分时，极性大的组分后出峰。;7.3.7 化学键合色谱法3.离子对色谱法;在反相色谱法中，通过调节流动相的pH值，抑制样品组分的解离，增加它在固定相中的溶解度，以达到分离有机弱酸、弱碱的目的，这种技术称为离子抑制色谱法。 ⑴ 适用范围 适用于3.0≤pKa≤7.0弱酸；7.0≤pKa≤8.0弱碱。 ⑵ 抑制剂 流动相中加入少量的弱酸、弱碱或缓冲溶液为抑制剂(常用乙酸、氨水、磷酸盐、乙酸盐)。;⑶ 影响容量因子的因素 对于弱酸，当流动相pH＜pKa时，组分以分子形式为主，k值增大，tR增大；反之，组分以离子形式为主，k值变小，tR减小。 对于弱碱，以上两种情况正好相反。 ⑷ 用途 可用于有机弱酸、弱碱与两性化合物的分离，以及它们与分子型化合物共存时的分离。 不适用于pKa＜3的酸、 pKa＞8的碱，这些可采用离子对色谱法、离子交换色谱法进行分离。;7.3.8 其他色谱法(阅读) ;概念：高效液相色谱法(HPLC)是在20世纪60年代末，以经典液相色谱为基础，引入了气相色谱的理论，在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和高灵敏度的在线检测器，从而发展起来的一种新型分离分析技术。随着科学和技术的不断改进与发展，目前已成为应用极为重要、广泛的分离分析手段. 特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。;HLPC与经典液相色谱和气相的比较4.23;;HPLC与经典LC和GC在基本原理、概念和方法基本上相同，主要差别是流动相的性质不同。因此，某些公式的表现形式或参数的含意有些差别。 　1. Van Deemter 方程式 ;1. Van Deemter方程式;1. Van Deemter方程式;1. Van Deemter方程式;7.5.1定性分析方法 7.5.2定量分析方法;1 色谱??定　保留值对比鉴定 2 化学鉴定　分离制备后鉴定 3 色谱－光谱联用鉴定;工作曲线法;(1)内标对比法不需校正因子。药物分析常用示量％表示;例10-3 用内标法测定复方乙酰水杨酸片(APC)中阿司匹林A、非那西汀P、咖啡因C三组分的质量分数，扑热息痛S作内标物。实验条件：色谱0.4×50cm日立3010胶；流动相：甲醇/三乙醇胺=1/500，流量1mL/min；UV273 nm检测。实验结果如下表。样品溶液：称取1片量的药品粉末0.5005g经多次萃取后配制成100mL溶液。wA、wP、wC为样品中三组分的未知质量(g/片)，0.5005g为加入内标物的质量。试用内标对比法求： ⑴每片中A、P和C的含量； ⑵每片中A、P和