IL18及PDTC对肾小球系膜细胞增殖和分泌的影响.pdf

郑州大学2007{F硕十研究，I-论文 IL—18及PDTC对肾小球系股细胞增殖幕1分泌的影响 噬细胞分泌。结构和IL-113相似而功能和IL．12相仿。由于其能诱导Thl等细胞产生 IFN-T，最初被命名为IFN吖诱导因子(IGIF)。鉴于其的氨基酸序列与已知数据库中 的任何蛋白质均不相同，命名为IL．18。1L．18除了能诱导多种细胞产牛IFN-y夕b，还 能诱导免疫细胞产牛细胞因了，促进免疫细胞表达FasL、增强Fas介导的细胞毒作用 等多种牛物学功能。此外，核转录因予一KB(NF．KB)信号途径也参与IL．18激活的信 号传导，NF—KB是重要的核转录因子，激活的关键在于抑制性蛋白l曲的磷酸化和 降解，NF-tcB活化后，NF．tcBP65由胞浆转位于胞核中与相应DNA序列结合，上调相 应基因的表达。近年来发现IL．18与原发性肾小球疾病、狼疮性肾炎、慢性肾衰竭、 急性肾衰竭等多种肾脏疾病的发牛发展密切相关。最近研究表明，在T2DM患者的 血浆和尿液中均有IL—lsYl。高，并随T2DM的病程和肾脏病变的不断进展，血浆中和 尿液中IL—18的含量成高度正相关。刘华锋等用免疫组织化学方法检测原发性肾病综 合征患者和原发性肾小球肾炎患者的肾组织发现，在膜增生性肾小球肾炎和系膜增 生性肾小球肾炎中均有较高的IL-18表达量。国外研究也表明，糖尿病患者的血清中 反应蛋白和尿＆微球蛋白呈正相关。都提示IL．18在糖尿病肾病发生发展过程中可能 起到重要作用，并和炎症反应有关。 本研究在体外进行MC原代培养，在高糖环境下以外源fJEIL．18N激MC，旨在观 察不同浓度的外源性IL．18对MC增殖、分泌CO—IV、LN和表达肿瘤坏死因子(TNF) 一n的影响，并进一步观察了抗氧化剂毗咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对萸影响作 用，了解IL-18在DN发生机制中的作用和PDTC对其抑制作用，为进一步研究以IL-18 或NF-r．B作为靶点治疗DN提供实验依据。 【方法】 本研究通过体外原代培养MC，观察IL-18和PDTC对MC增殖、分泌CO-Ⅳ、 LN和表达TNF-a的影响，并对其机制进行了初步观察。实验对象分为IL．18组和 MC Ⅱ 郑州人学2007年硕}研究，l论文 IL—18及PDTC对肾小球系膜细胞增殖种分泌的影响 因了-rB(NF4cB)的激活情况。 【结果】 1．原代培养MC，消化接种的肾小球残体第3～5天有50％～60％贴壁，第7 天可见细胞移出，此后，肾小球残体大部分瓦解，结构消失。肾小球系膜细胞占优 势，上皮细胞基本消失，3～4周后，系膜细胞长满瓶底，此时可进行传代。传代培 养的系膜细胞24小时内全部贴壁，生长迅速，7～10天长满瓶底，倒置显微镜下观 察MC呈梭形或星形，细胞核呈圆形或卵圆形，胞质向外伸出较多长短不一的突起。 免疫细胞化学sP法鉴定培养的细胞抗结蛋白、抗洳平滑肌肌动蛋白单抗染色阳性， 抗细胞角蛋白、抗Ⅷ因子相关抗原单抗染色阴性。表明培养的细胞为肾小球系膜细 胞。 组与A组相比，两组的彳值差别无统计学意义(P0．05)而E组低于B组(P 3．在单纯IL．18作用组中，随着IL。18浓度的升高，上清液中CO-IV的含量逐 渐增多，与对照组相比较，差异有统计学意义(PO．01)，50峙，L组与2599／L组相 D组与A组相比差别无统计学意义(PO．05)。E组低于B组，F组低于C组，差 系膜细胞分泌CO-Ⅳ和LN。 后均有TNF．nmRNA表达，与对照组相比较差别有统计学意义(户O．01)，且后者 mRNA。IL—18处理组 明显高于前者(PO．01)，说明IL．18能诱导MC表达TNF--a 111 jlIf州人学2007年硕十研究m论文 lL．18及PDTC村肾小球系JIf{细胞增贿用1分泌的影响 加PDTC后TNF．a 诱导的TNF．ⅡmRNA表达。 5．采用免疫细胞化学sP法检测NF-·cBP65的表达情况，镜下NF．KBP65阳性 细胞以细胞核染色为主，间有细胞浆染色，NF-rBP65阴性细胞则以细胞浆染色为 主，问有细胞核染色，呈棕黄色，并可见棕黄色颗粒沉积。对照组和D组细胞核内 NF-rB p65表达阴性；25p．g／L