HL-60细胞裸鼠异种移植瘤差异蛋白质的研究.pdf

HL-60 细胞裸鼠异种移植瘤差异蛋白质的研究 摘 要 作为血液系统的恶性肿瘤，白血病细胞具有细胞异质性的特点。白血病细 胞株 HL-60 在建株后即以表现出细胞形态上的异质性，培养的 HL-60 细胞表现 出恶性浸润生长的特性。已肯定随着成瘤率提高，高致瘤 HL-60 细胞的各种生 物学特性必然发生改变，但引起改变的内在机制不明，也未见文献报道。蛋白 质组学作为全面分析蛋白质表达变化的有力工具，已广泛应用到疾病特别是肿 瘤研究之中。有鉴于此，我们应用蛋白质组学方法，筛选并鉴定致瘤性不同的 各代 HL-60 细胞间差异表达的蛋白质，探索高致瘤 HL-60 细胞致瘤率提高的机 制，为了解白血病发病机制、病情发展和预后等提供重要价值的研究资料。 本实验利用 DIGE 双向电泳技术得到致瘤性不同的四代瘤细胞 HL-60- G1(致瘤率 30%) 、HL-60-G2(致瘤率 50%) 、HL-60-G3(致瘤率 80%)和 HL-60- G4(致瘤率 100%)与普通型 HL-60 细胞相比蛋白表达的差异，应用 DeCyder 6.5 图像分析软件筛选出显著差异表达的蛋白质（ratio≥1.5，p≤0.01 ），并使用质谱 技术对差异表达的蛋白进行鉴定，同时根据 Swiss-Prot 库的注释信息对蛋白进 行细胞定位和功能分析。最后对部分蛋白进行 Western blot 及免疫组化验证。 本实验共筛选出 87 个差异表达点，其中有 33 个点在高致瘤样本 HL-60-G4 中显著上调，54 个点在高致瘤样本 HL-60-G4 中显著下调。经 MALDI-TOF- TOF 分析，在 33 个上调蛋白点中 26 个点得到鉴定，对应 12 中基因表达产 物；在 54 个下调点中，有 39 个点鉴定为 13 种基因表达产物。根据 Swiss-Prot 库的注释信息对鉴定出来的蛋白进行了细胞定位及功能分析，发现上调蛋白点 主要定位于细胞核，而下调蛋白点主要定位于细胞质。同时这些蛋白的功能主 要分为：结合、催化、转录调节、转运等。运用 Western blot 技术及免疫组化 技术分别对两个上调蛋白 T-complex protein submit alpha 和 Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1 ，两种下调蛋白 Enolase 1 和 Glutathione S- transferase P 进行了验证，结果与 DIGE 结果有较好的一致性。 本实验中我们成功的运用蛋白质组学技术初步筛选、鉴定、分析并验证了 多个与致瘤性提高相关的差异表达蛋白，这些上调或下调的蛋白质在致瘤性提 高的发生、发展过程中起到重要的作用。对这些蛋白的深入研究，可能为急性 4 髓系白血病的发生及发展提供重要价值的参考资料。 关键词：HL-60 蛋白质组学 DIGE Western blot 5 Differential protein analysis of HL-60 cell xenograft tumor in nude mice Abstract As the blood system cancer, leukemia cells have the characteristics of cellular heterogeneity. The HL-60 cells, commonly used human myeloid leukemia cell line, h