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三株鸡源大肠杆菌iss基因检测 　　摘要：采用鸡胚致死对HL11、HL32、SD27鸡源大肠杆菌（Escherichia coli）的致病性进行测定，并检测其血清抗性及iss基因序列。结果表明，3株大肠杆菌为致病性、血清补体敏感菌株，iss基因序列与已知禽大肠杆菌iss基因序列同源性为99.0%～99.7% 关键词：鸡源大肠杆菌（Escherichia coli）；iss基因；致病性；血清抗性 中图分类号：S831 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2016）22-5969-03 DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2016.22.060 Detection of iss Gene of Three Avian E.coli Strains FAN Chen1，XU Wang-ye2，ZENG Qing-hua1，WANG Hui1，LI Yan1，WANG Lei1，GUO Xing-feng1 （1.Agricultural School，LiaoCheng University，Liaocheng 252059，Shandong，China； 2.College of Veterinary Medicine，Northeast Agricultural University，Harbin 150030，China） Abstract：The virulence of avian E.coli strains HL11，HL32，SD27 were detected by embryo lethality assay. The presence of iss gene and complement resistance were tested. Results showed that three strains are pathogenic and complement sensitive. The iss sequences have 99.0%～99.7% identity with reference sequence. Key words：avian E.coli； iss gene； virulence； complement resistance 大肠杆菌（Escherichia coli）是食品污染程度的重要指标，某些血清型的大肠杆菌对人类和动物具有致病性，对婴幼儿以及家禽尤为明显[1，2]。大肠杆菌病为人畜共患病，受到大肠杆菌污染的食物被食用后，可以导致食物中毒甚至是严重的败血症，并增加其他病原体感染机会，如痢疾、霍乱或者伤寒等肠道疾病，对食品安全有较大影响[2-4]。大肠杆菌的血清型繁多，但不同血清型的大肠杆菌有共同的致病物质基础[4，5]。研究发现，与大肠杆菌毒力相关的致病因子有1型菌毛、毒素、外膜蛋白、ColV质粒、补体抗性、铁转运系统等[6-9] 在大肠杆菌诸多致病因子中，菌毛在致病性大肠杆菌侵入机体，并在体内定居、增殖、释放毒力因子的过程中起着重要的作用。但细菌进入机体血流后，将面对血液中的杀菌物质，如补体等。细菌抵抗血液中杀菌物质的能力，对细菌致病力有重要影响。研究表明，iss基因（Increased serum survival gene，iss gene）存在于ColV?|粒上，iss基因编码的蛋白Iss属于外膜蛋白的一部分，与细菌抗补体作用有关，可增强大肠杆菌的血清抗性[10]。本试验对鸡源大肠杆菌HL11、HL32、SD27进行了致病性检测，并对iss基因进行序列测定，探讨iss基因序列与大肠埃希菌致病力的相互关系，为iss基因作为毒力标志基因在大肠杆菌毒力判定、食品安全检测中的应用等提供理论依据 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 菌株 HL11、HL32为东北农业大学动物医学学院分离，30%甘油-20 ℃保存；SD27为聊城大学农学学院分离，30%甘油-20 ℃保存 1.1.2 引物 参考GenBank中的禽大肠杆菌iss基因核苷酸序列（登入号：AF042279）设计两对引物。引物1上游：5agctatcgtttaattattatcac3’；引物1下游5gtagggagcccagaagtat3’；引物2上游：5cgcggatccag gattctgccgttttta3’；引物2下游：5cgcgtcgaccatatcgatggg caacta3’[11] 1.1.3 试剂 伊红美蓝培养基、麦康凯培养基、营养肉汤培养基、生化试验鉴定管等购自青岛海博生物技术有限公司。蛋白酶K、RnaseA、rTaq酶、pMD18-T克隆载体及相关试剂均购自宝生