pET-32a(+)大肠杆菌表达载体说明.pdf

pET-32a(+) 编号 名称 北京华越洋VECT-230 pET-32a(+) pet32a 载体基本信息 别名: pET32a, pet 32a 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达 表达水平: 高 克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶 载体大小: 5900bp 5 测序引物: T7 ： 5-TAATACGACTCACTATAGGG-3 3 测序引物: T7t: 5-GCTAGTTATTGCTCAGCGG-3 载体标签: thioredoxin (N 端); His (中间和C 端) 载体抗性: 氨苄 备注: pET32a 载体用于表达可溶性，具有活性功能的蛋白;pET-32a(+)载体具有 N 端Thrombin （凝血酶）酶切位点，N 端肠激酶酶切位点。pET32 啊，pET32b， pET32c 载体的差异主要是在于多克隆位点，其他地方完全一致。 稳定性: 瞬时表达 组成型: 组成型 病毒/非病毒: 非病毒 pet32a 载体质粒图谱和多克隆位点信息 pet32a 载体简介 pET32 系列载体是设计用来克隆构建和高水平融合表达表达带有109 个氨基酸Trx 标签的蛋 白质序列。将基因插入到载体的多克隆位点，能够获得融合表达蛋白质。同时融合蛋白包含 有His 标签和S 标签，这些可以用于蛋白表达检测和纯化过程。 载体的多克隆位点见上面的图谱。需要注意的是图谱中的核苷酸编码顺序是以pBR322 载体 的复制方向为正方向，所以T7 表达区域在图谱中是处于反向的位置。T7 RNA 聚合酶启动的 克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的 F1 复制子是被定向的，所以在 T7 噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒 粒子能够产生，并启动蛋白表达，同 时蛋白表达将被T7 终止子序列(Cat. No. 69337-3)的作用下终止蛋白翻译。 pet32a 载体序列 ORIGIN 1 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 61 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGTGG CAGCAGCCAA CTCAGCTTCC TTTCGGGCTT 121 TGTTAGCAGC CGGATCTCAG TGGTGGTGGT GGTGGTGCTC GAGTGCGGCC GCAAGCTTGT 181 CGACGGAGCT CGAATTCGGA TCCGATATCA GCCATGGCCT TGTCGTCGTC GTCGGTACCC 241 AGATCTGGGC TGTCCATGTG CTGGCGTTCG AATTTAGCAG CAGCGGTTTC TTTCATACCA 301 GAACCGCGTG GCACCAGACC AGAAGAATGA TGATGATGAT GGTGCATATG GCCAGAACCA 361 GAACCGGCCA GGTTAGCGTC GAGGAACTCT TTCAACTGAC CTTTAGACAG TGCACCCACT 421 TTGGTTGCCG CCACTTCACC GTTTTTGAAC AGCAGCAGAG TCGGGATACC ACGGATGCCA 481 TATTTCGGCG CAGTGCCAGG