western blot相关Buffer配方.pdf

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2017-06-12 发布于河南
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western blot相关Buffer配方

Buffer Preparation (Gozani Lab) 1. 1 M Tris-HCl Buffers pH Volume (L) TrisBase (g) HCl (ml) pH 7.0 2 242.2 150-155 pH 7.5 2 242.2 120-125 pH 8.0 2 242.2 80-85 Autoclavable. 2. EDTA 0.5 M (pH8.0) 0.5M, 1L: 148 g EDTA + ~30-40 g NaOH to adjust pH (or 186 g EDTA-Na.2H2O + ~20 g NaOH) Note: pH adjusted by NaOH is essential for solubility. Autoclavable. 3. TAE DNA Electrophoresis Buffer (50 X) (2 M Tris, 50 mM EDTA) 2 L 484 g Tris 114.2 ml glacial acetic acid 200 ml 0.5 M EDTA 8.0 To make 1x TAE 20 L, add 400 ml 50X buffer into 19.6 L ddH2O. 4. SDSGel Solutions Vol (L) Tris (g) HCl (ml) 10% SDS (ml) 4x Lower gel buffer 1.5 M Tris-Cl, pH 8.8, 2 363.3 50-60 80 ml 0.4% SDS 4x Upper gel buffer 0.5 M Tris-Cl, pH 6.8, 2 121.1 70-80 80 ml 0.4% SDS 4.1 10% SDS 1L: o 100g SDS into 1 L, heat to 68 C for solubility. pH ~6.6. 5. 5X SDS Loading Sample Buffer 100 ml Stock solution Add volume 250 mM TrisHCl pH6.8 2 M 12.5 ml 10% SDS 10 g 30% Glycerol 30 ml 5% β-mercapitalethanol (or 0.5M DTT) 5 ml 0.02% bromophenol blue 0.04% 52 ml 6. 6X DNA loading sample buffer: (40% sucrose, 0.01-0.02% BPB) 100 ml Add 40 g sucrose to 50 ml 0.04% BPB solution, adjust final volume 100 ml. 7. SDSElectrophoresis Running Buffer (10x) (1x: 25 mM