液相色谱法附III D BP2010、2011.doc

附录III D　　　 液相色谱法BP2008液相色谱法是基于各组分在互不相溶的两相中的分配差异，组分随液体流动相在含固定相的色谱柱中分离的色谱技术。流动相为通过嵌有固定相色谱柱进行渗透的液体。液相色谱法是基于质量分布、吸附机理，离子交换，分子筛或者立体化学的相互作用等机理来完成的。仪器装备装备系统由泵系统，进样器，色谱柱（可能会有柱温控制器），检测器和数据采集系统（积分仪或图形记录仪），流动相通常是由一个或几个储液瓶提供，以恒定的流速经色谱柱后进入检测器。泵系统液相色谱的泵系统是以恒定的速率传送流动相的装置，将压力脉动设至最小，例如采用加压溶剂流过脉冲抑制装置的方法。管道和连接系统能够抵挡来自泵系统的压力，液相色谱泵应配备一个渗出气泡的装置。控制面板能够通过一个设置好的程序精确地传送恒定（等度洗脱）或变化组分的（梯度洗脱）的流动相。梯度洗脱时，泵系统可以从几个储液瓶中传送溶剂，同时在泵的高压或低压都能够很好的混合溶剂。进样器样本溶液通过能够在高压操作的进样系统，在色谱柱的顶端或接近顶端处将液体注入流动的流动相中。进样器可为手动或自动的固定环或可变容积装置。局部手动进样环可能会降低注射体积精度。固定相液相色谱中有许多不同类型的固定相，包括：——二氧化硅，氧化铝或固体石墨，应用于基于吸附原理或质量分布原理来达到分离效果的正相色谱。——具有酸碱集团的树脂或高分子聚合物，应用于离子交换色谱，是基于流动相中不同离子的竞争原理来进行分离的。——多孔性二氧化硅或聚合物，应用于排阻色谱，是基于分子容量的不同（与立体排斥类似）的原理来进行分离的。——在高分子，硅胶或多孔石墨的基础上进行不同的化学分子修饰，应用于反相液相色谱，是基于流动相和固定相的不同微粒的原理进行分离的。——特殊化学修饰的固定相，如纤维素，直链淀粉衍生物，蛋白质或多肽类物质环糊精等，利用对映体进行分离（手性色谱）。大多数分离技术是基于以经过化学修饰的硅作为固定相，以极性溶剂作为流动相的分离机制，载体的表面活性，例如，有硅醇聚合的二氧化硅，可以和各种硅烷试剂反应产生有许多活性部位的甲基硅烷衍生体的共价载体表面。键合相是决定色谱系统分离性能的一个重要的参数。通用的键合相如下所示：辛基 = Si-(CH2)7-CH3 C8 十八基 = Si-(CH2)17-CH3 C18 苯基 = Si-(CH2)n - (C6H5) C6H5 氰丙基 = Si-(CH2)3-CN CN 氨丙基 = Si-(CH2)3-NH2 NH2 二醇 = Si-(CH2)3-O-CH(OH)-CH2-OH除非是生产厂商规定，硅基反相色谱柱在明显变化的PH2.0~8.0范围内的流动相中是稳定的。含有多孔石墨或高分子材料微粒如苯乙烯二乙烯苯共聚物的色谱柱在一个很大PH范围内是稳定的。在某些情况下，可用以未修饰的二氧化硅，多孔石墨或者极性的经过化学修饰的如氰丙基或二醇修饰的硅为固定相，非极性的溶剂为流动相的正相色谱进行分析。对于分析分离技术，最常用固定相的粒径为3μm~10μm，颗粒可能是球形的或不规则的，具有多孔隙度或不同的比表面积。这些参数有助于一些特殊固定相的色谱分析。对于反相色谱，固定相键合的程度可用连接的碳的数量来表示，并增加是否在末端包覆（残留的硅醇团为甲烷硅基化的）的测定因素。当存在残余硅醇基时，可能会出现峰的拖尾现象，尤其是基质峰。除非在论著中有特别的说明，色谱柱一般是不锈钢做成的，分析性色谱的色谱柱的长度和内直径是可变的，内直径小于2mm的色谱柱常称为微径柱，分析时流动相和色谱柱必须保持恒温。大部分分离都在室温下完成，但是色谱柱会被加热以获得更高的效率。由于温度过高固定相的性能会退化或改变而使流动相的组成发生变化，故而建议色谱柱加热温度不超过60°C。流动相对于正相层析，可用弱极性溶剂，流动相应严格控水，使实验结果获得较好的重现性。在反相液相色谱中，可用有机修饰或未修饰的含水流动相。流动相的组成部分通常会被