细胞工程4植物组织器官培养技术.ppt

细胞工程 课程初步安排：36学时第一章 　绪论 4个学时第二章 　实验室配置及基本技术 2个学时第三章 植物细胞工程的理论基础 4个学时　第四章 　植物组织器官培养技术 6个学时第五章 　植物细胞培养及次生代谢产物生产 3个学时第六章 　原生质体培养和体细胞杂交 3个学时第七章 　人工种子 1个学时第八章 　植物种质资源离体超低温保存 1个学时第九章　　动物组织培养　　　　　　　　　 3个学时第十章　　动物细胞融合与单克隆抗体 4个学时　　　第十一章　动物组织与胚胎工程 1个学时　　　　　　第十二章　试管动物与克隆动物 2个学时 植物细胞工程的中心内容是植物细胞和组织的离体培养； 从技术上说，它是一种从单细胞到植株的无性繁殖技术； 从遗传的角度来讲它具有双重性，一是遗传的保守性，二是遗传的变异性。利用其保守性我们可以进行植物的快速繁殖，建立植物种质资源库以及生成有用化合物；利用其变异性我们可以进行体细胞诱变、体细胞杂交以及基因工程。 意义 任何一个优良品种均需要有一个忠实地保存其遗传性状的繁殖方法。 离体无性繁殖主要是以植物营养器官为外植体，繁殖过程在人工控制的环境条件下，所以既不会造成性状分离同时还避免了病虫害的侵染，从而可以很好地保持品种的优良特性，是异交作物和无性繁殖品种繁殖的一个非常理想的途径。 繁殖系数（breeding coefficient）：也叫增殖率，指每块外植体在一个培养周期内增殖的倍数。 离体繁殖周期短（1～3个月），不受季节限制，因此繁殖系数高（几十至几百倍），繁殖速度是任何其它方法所不能比拟的，所以通常将组织培养繁殖称之为快繁（rapid clonal propagation）。 目前受病毒为害严重的作物有： ①大田作物 马铃薯、甘薯、甘蔗和烟草。 ②蔬菜 白菜、大蒜、葱、番茄和萝卜。 ③果树 柑橘、苹果、草莓和香蕉。 ④花卉 香石竹、各种菊花、天竺葵和紫罗兰等。 对于那些以块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物来讲，每年相当一部分产品要用作留种。如： ①大蒜 留种量占产量的1/5～1/8。 ②马铃薯 留种量占产量的1/10。 ③贝母 留种量占产量的1/3。 常规营养繁殖器官多是块根、块茎、鳞茎、枝条等，体积大、含水量高，包装、运输十分不便，特别是远距离调运损失很大。 离体繁殖的种苗体积小，一般自带容器，很容易携带，运输方便。 -以马铃薯为例来讲，按1亩地4000株计算，常规种薯4000个重约200kg,若用试管薯4000个则只有2kg。 植物茎尖脱毒 基本原理 技术规程 影响脱毒效果的因素 茎尖脱毒是控制植物病毒的有效途径 －药物防治病毒效率低 －抗病毒育种步履艰难 －组织培养的高效隔离防止了病毒的再侵染 脱毒－保持种性－快繁已是一个系统技术，在许多无性繁殖作物的种苗生产上均形成了自己的体系。 病毒在植物体内的分布具有不均匀性 －1934年，White发现烟草花叶病毒（TMV）在烟草根中分布是不均匀的，越靠根尖区病毒含量越低，在根尖的顶端（生长点）不含病毒。 －1949年，Limaset和Cornuet根据White的发现推测，病毒在烟草茎中的分布也可能存在与根部组织同样的情况，茎尖分生组织也应不带病毒。 －1952年，Morel和Martin首先利用茎尖分生组织培养获得了大丽花和马铃薯无病毒苗，同时建立了茎尖脱毒的组织培养技术体系。 能量竞争 传导抑制 激素抑制 酶缺乏 抑制因子 （1）被脱毒植物携带病毒的诊断 （2）母体材料的选择和预处理 （3）茎尖分生组织培养再生植株 （4）脱毒效果检测 （5）脱毒苗的保存与繁殖 （1）被脱毒植物携带病毒的诊断 （2）母体材料的选择和预处理 外植体预处理： ?香石竹在38℃～40℃条件下经两个月处理可除去全部病毒。 ?菊花在35℃～38℃的条件下处理60天可使病毒失活。 ?马铃薯在37℃条件下处理10～20天能除去卷叶病毒。 柑橘－速衰病毒/黄化病毒40℃/30℃条件下处理7～12周。 鳞皮病毒需要在40℃/30℃条件下处理8周。 啐叶病毒需要在50℃条件下处理3～22小时。 洲青果病毒在50℃条件下处理30～40分钟。 （3）茎尖分生组织培养再生植株 －外植体消毒 在切取外植体之前茎芽进行表面消毒。叶片包被严紧的芽，如菊花、兰花，只须75%酒精中浸蘸一下，而