CRISPR Cas9 基因敲除试剂盒 产品说明书.PDF

        CRISPR Cas9 基因敲除试剂盒  产品说明书  本说明书适用于以下产品： 货号 货号 Cas9 基因敲除试剂盒 CR0001 pCas9/gRNA1 载体 CR1001 pTYNE 验证载体 CR1011 北京英茂盛业生物科技有限公司  北京市昌平区沙河镇青年创业大厦 B-916 Tel ：010 Emai ：order@ Web site ： 产品说明书 产品内容  Cas9 基因敲除试剂盒 货号 CR0001 内容  包装  pCas9/gRNA1 载体 3ug in TE Buffer pTYNE 验证载体 3ug in TE Buffer pCas9-P 阳性对照载体 3ug in TE Buffer pCas9-N 阴性对照载体 3ug in TE Buffer pCas9/gRNA1 载体 货号 CR1001 内容  包装  pCas9/gRNA1 载体 3ug in TE Buffer ppTYNE 验证载体 货号 CR1011 内容  包装  pTYNE 验证载体 3ug in TE Buffer 保存条件：  -20 ℃冻存 所需其他材料  EcoRV 限制性内切酶。T4 DNA ligase 。 dH5a、Top10 或其他常用感受态细胞。 细胞培养基及其他细胞培养相关试剂。 HEK293T 细胞或 293V 细胞（货号 C1201 ）。 转染试剂（Polyfect-V 货号 P2010-1）。 1 北京英茂盛业生物科技有限公司 Tel: 010 Email: order@ 产品说明书 CRISPR Cas9 基因敲除原理 CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其 他外源 DNA 的免疫机制。在该机制中，Cas 蛋白（CRISP-associated protein ）含有两个核酸酶结构域，可以 分别切割两条 DNA 链。一旦与 crRNA （CRISPR RNA ）和tracrRNA 结合形成复合物，Cas 蛋白中的核酸酶即 可对与复合物结合的 DNA 进行切割。切割后 DNA 双链断裂从而使入侵的外源 DNA 降解。 来自 Streptococcus pyogenes 的 Cas9 由于 PAM 识别序列仅为 2 个碱基（GG ），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。Cas9 蛋白在目前测试过的几乎所有生物和细胞中均有活性，包括细菌、 酵母、植物、鱼、以及哺乳动物细胞。识别 RNA （gRNA ）可以通过载体表达或者化学合成后与 Cas9