高效液相色谱法测定板蓝根水提物(R―s)―告依春含量.docVIP

高效液相色谱法测定板蓝根水提物(R―s)―告依春含量 　　[摘要]目的采用高效液相色谱法测定板蓝根水提物中（R-s）-告依春的含量，对板蓝根提取物进行质量控制。方法高效液相所用的色谱柱为phenomenex（250mm×4.6mm，5um），流动相为甲醇-水（15：85），流速为1mL/min，柱温为30°C，检测波长为245nm。结果在含量测定中，（R-s）-告依春的质量浓度在1.6125～51.6ug/mL范围内与其峰面积呈良好的线性关系（R2=0.99954，n=6）。结论本方法快速、准确、精密度、稳定性、重复性好，可以测定板蓝根药材中（R-s）-告依春的含量 [关键词]板蓝根提取物；高效液相色谱法；（P.-S）-告依春；含量测定 [中图分类号]R286.0 [文献标识码]B [文章编号]2095-0616（2016）23-57-04 板蓝根为十字花科植物菘蓝（Isatis indigoticaFort）的干燥根，载于《神农本草经》中，是传统的抗病毒中药之一。长时间的临床调查与研究已经表明板蓝根具有清热解毒，凉血利咽的功效。可用于肺胃热导致的口干舌燥、咽喉肿痛、腮部肿胀、腮腺炎、急性扁桃体炎等症的治疗。板蓝根中含有靛玉红、（R-S）-告依春、蔗糖、靛蓝、氨基酸等多种有效成分，查阅相关文献可知，板蓝根的这几种成分都有相关学者在研究，并且得到了很多的研究成果。（R-S）-告依春是板蓝根中抗病毒的代表性成分，本研究旨在进一步制定板蓝根配方颗粒质量控制的新方法，为相关研究提供依据及参考。现将结果报道如下 1.材料与仪器 1.1仪器 高效液相色谱仪紫外一可见光（型号：SPD-16，岛津仪器有限公司）；KQ2200型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；（50mL、100mL、1000mL）量筒；微孔滤膜过滤装置；25mL容量瓶；万分之一天平 1.2材料与试剂 板蓝根药材饮片（安徽源和堂药业股份有限公司，151021）；（R-S）-告依春对照品（中国食品药品检定研究所，251505）；甲醇 2.板蓝根水提物的制备 以加水量、提取次数、提取时间作为三个研究因素来研究板蓝根的水提工艺。依据相关文献资料设置三个水平参数，优选出最佳的提取工艺。板蓝根提取工艺的提取流程为：用粉碎机将板蓝根饮片打粉，取2号及4号筛中间的粉末和4号筛筛下的粉末。每次按（过4号筛不超过40%）的比例取中间粉和筛下粉20g，用自来水提取，用正交设计法，设计出九组不同的加水量，提取次数，提取时间提取工艺，每一组平行重复三次，将每组提取得到的提取液放入离心机中离心。取离心过后提取液的上清液，置85℃水浴锅上水浴蒸发掉溶剂，将在水浴锅上蒸的粘稠浸膏放入60℃烘箱中烘干，得干浸膏，计算出膏率 3.板蓝根浸膏中（R-S）-告依春的含量测定 3.1色谱条件 为了使（R-S）一告依春更好地显现在高效液相分析图中，需要确定一个有效的分析方法及检测条件。查阅相关文献，对影响供试品中（R-S）一告依春出峰的几个因素进行考察：色谱柱类型的选择，流动相的选择及流动相比例的选择，柱温箱温度的选择，流速的选择及检测器的选择等 由于C18色谱柱具有适应性好，保留值大，稳定性好等诸多优点，已经作为高效液相中使用最广泛的色谱柱种类之一。色谱柱phenomenex（250ram×4.6mm，5um）的分离效果可以达到（R-S）-告依春很好的分离，故选用C18色谱柱phenomenex（250mm×4.6mm，5um） 因为本次实验所用流动相的比例已经确定，故采用等度洗脱的方法，用甲醇和水作为流动相，流动相的比例为15：85。先把洗脱时间设计为30min，通过用对照品溶液的摸索，可以得到（R-S）-告依春大约在7.5min左右出峰。所以把洗脱时间设计为10min，每次的进样量为20uL，检测波长设为245nm，流速设为1mL/min，柱温箱的温度设为30℃ 3.2溶液的制备 3.2.1对照品溶液的制备用万分之一电子天平精密称取（R-S）-告依春对照品1.032mg，加入10mL容量瓶中，加入水至刻度，配成浓度为103.2ug/mL的对照品溶液。从103.2ug/mL对照品溶液中精密吸取1mL，并吸取1mL水，加入到刚才吸取的1mL对照品溶液中，配制成浓度为51.6ug/mL的对照品溶液，同样的方法配制浓度为1.6125ug/mL，3.225ug/mL，6.45ug/mL，12.9ug/mL，25.8ug/mL的对照品溶液 3.2.2供试品溶液的制备精密称取一定量的板蓝根浸膏，相当于0.4g的板蓝根药材粉末，精密加入超纯水25mL，振荡摇匀使溶解。用针管和微孔滤膜将溶解过的板蓝根溶液过滤并注入EP管中，