第一章 蛋白质化学2015.ppt

（5）蛋白质的沉淀反应 1. 加高浓度盐类（盐析）：加盐使蛋白质沉淀析出。 2. 加有机溶剂 3. 加重金属盐 4. 加生物碱试剂 单宁酸、苦味酸、钼酸、钨酸、三氯乙酸能沉淀生物碱，称生物碱试剂。 5.加热 反应名称 试 剂 颜色 反应有关基团 有此反应的蛋白质或氨基酸 双缩脲反应 NaOH、CuSO2 紫色或粉红色 二个以上肽键 所有蛋白质 米伦反应 HgNO3Hg(NO3)2及HNO3混合物 红色 ? Tyr 黄色反应 浓HNO3及NH3 黄色、橘色 ? Tyr、Phe 乙醛酸反应 (Hopking-Cole反应) 乙醛酸试剂及浓H2SO4 紫色 ? Trp 坂口反应 (Sakaguchi反应) α-萘酚、NaClO 红色 胍基 Arg 酚试剂反应 (Folin-Cioculteu反应) 碱性CuSO4及磷钨酸-钼酸 蓝色 酚基、吲哚基 Tyr 茚三酮反应 茚三酮 蓝色 自由氨基及羧基 α-氨基酸 ? （６）蛋白质的颜色反应 —OH N 2.6.2蛋白质的分离和分析技术 （1）根据蛋白质的溶解度的不同进行分离 1）盐析 2)等电点沉淀法 3)低温有机溶剂沉淀法 （2）根据蛋白质分子的大小进行分离 1）透析与超滤 2）凝胶过滤法 2.6.2蛋白质的分离和分析技术 （3）根据带电性质进行分离 1）电泳法 2）离子交换层析法 （4）根据配体特异性进行分离 1）亲和层析法 电泳 章首 蛋白质的性质及纯化 章首 亲和层析 测定多肽链的数目并分离 2.6.3蛋白质一级结构的测定 拆分多肽链 断开多肽链内的二硫键 鉴定多肽链的N-末端和C-末端 裂解多肽链为较小的肽段 测定各肽段的氨基酸序列 利用重叠肽重建完整多肽链的一级结构 确定二硫键的位置 蛋白质测序 的步骤 蛋白质的 一级结构确定的原则：将大化小，逐段分析，制成两套肽片段，找出重叠位点，排出肽的前后位置，最后确定蛋白质的完整序列。 测定每一肽链的氨基酸组成 体内的某些蛋白质分子初合成时，常带有抑制肽，呈无活性状态，称为蛋白质原.蛋白质原的部分肽链以特定的方式断裂后，才变为活性分子体. 一级结构的局部断裂与蛋白质的激活 D/L构型 DL是以甘油醛为参照标准的，在甘油醛分子的费歇尔投影式中，碳链竖向排列，氧化态高的碳原子位于上方，此时2位羟基在右边的为D，在左边为L,并不是实际测出的，所以叫相对构型。2.D/L构型命名法有其局限性，他只适合于含有氢原子的手性碳原子。 3.用D-/L-方法标记氨基酸时，羧基位于上端，R取代基位于下端。若氨基在左，则定为L-氨基酸；若在右则定为D-氨基酸 当两个氨基酸通过肽键相互连接形成二肽，在一端仍然有游离的氨基和另一端有游离的羧基，每一端连接更多的氨基酸。 头发 指甲等 角蛋白 蚕丝心蛋白 为了紧紧折叠成紧密的球蛋白，多肽链常常反转方向，成发夹形状。转角结构通常负责各种二级结构单元之间的连接作用，它对于确定肽链的走向起着决定性的作用。一个氨基酸的羰基氧以氢键结合到相距的第四个氨基酸的氨基氢上。Pro、 Gly 常出现在β-转角中 造成凸起股主链额外残基之所以被规则的氢键网所容纳，部分原因是凸起股产生微小的弯曲。因此β－凸起引起多肽链方向的改变，但改变程度不如β－转角 * β－凸起可认为是β－折叠股中额外插入的一个残基，它使得在两个正常氢键之间的在凸起折叠股上是两个残基，而另一侧的正常股上是一个残基 无规卷曲与生物活性有关，对外界理化因子极为敏感。 Protofilament：初纤维； 原丝； 原细丝； 条原纤维 protofibril：初纤维； 原纤维； 前原纤维； 原细纤维 Collagen:胶原 striation：条纹 胶原蛋白富含除色氨酸和半胱氨酸外的 18 种氨基酸，其中维持 人体生长所必需的氨基酸有 7 种。 胶原蛋白中的甘氨酸占 30 ％ ? ． ? 脯 氨酸和羟脯氨酸共占约 25 ％ ? ， 是各种蛋白质中含量最高的， 丙氨酸、 谷氨酸的含量也比较高．同时还含有在一般蛋白中少见的羟脯氨酸和 焦谷氨酸和在其他蛋白质几乎不存在的羟基赖氨酸。所以胶原蛋白的 营养十分丰富。 血红蛋白的四级结构得测定由佩鲁茨1958年完成，其结构要点为： 球状蛋白，寡聚蛋白，含四个亚基 两条α链，两条β链，α2β2 α 链：141个残基； β链：146个残基 分子量65 000 含四个血红素辅基 亲水性侧链基团在分子表面，疏水性基团在分子内部 * Astacin:虾红素 * Papain:木瓜蛋白酶 Cathepsin:组织蛋白酶 ２）结构域 　　　对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往由两个或两个以上相对独立的三维