柱层析、固相萃取和制备色谱.pptVIP

制备HPLC技术问题—条件的选择 从分析方法到制备方法的放大和方法的优化需要三个步骤： 　1. 优化分析方法的选择性。 2. 在分析柱上进行超量载样。 3. 放大到制备柱。 线性放大 非线性放大 制备HPLC技术问题—条件的选择 线性放大 指柱直径、长度（即柱体积）和流速等可以根据加样量的增加情况进行按比例线形放大。制备色谱中，最好的线形放大是在其他工艺条件不变的情况下，只改变柱子和流速，就可以放大生产，同时分离效果保持不变。成本比较大，同时也大大减少生产的产量和速度 非线性放大 制备HPLC技术问题—条件的选择 流速的调整 梯度洗脱 分离效果取决于梯度的选择，理论上梯度越小，分辨率越高。在分析上摸好条件，上制备柱往往还要降低一些洗脱液的浓度。 柱子再生 依次用水，甲醇，四氢呋喃，氯仿，甲醇来冲洗柱子，每种溶剂5-10个柱体积。 制备HPLC技术问题—条件的选择 1）制备的目的是在一次操作中尽可能地多上样，所以，首先得在分析柱上实现超载，否则，分析柱分离得再漂亮，再在制备柱中线性放大时就因为成本不合理而被无情地否决。 2）制备的目的是分离你所关心的组分，只要它能与其它杂质分离的好就行了，所以不要希望在分析柱上先得到所有组分的基线分离，完全没有必要！设计梯度时只需对目的物前后5-10%梯度的范围进行精细分离