促凋亡基因Smac在急性淋巴细胞白血病患儿中表达意义-文.PDFVIP

· 110 · ProceedingofClinicalM edicine，Feb．2013，Vol22No．2 文章编号 ：1671 8631(2013)02—011O—O3 促凋亡基因Smac在急性淋 巴细胞 白血病患儿中表达的意义 王晓欢，武坚锐 ，郝 国平 ，史红鱼 (山西省儿童医院，山西 太原 030013) 摘要 目的：探讨促凋亡基因Smac在儿童急性淋 巴细胞 白血病 (ALL)中的表达及其临床意义 。方法 ：收集 5O例 AIL患儿及 25例非恶性血液病患儿的骨髓 ，采用 RT—PCR技术检测Smac基因mRNA 的表达情况 。结果：Smac基因 在初治ALL患儿骨髓 中的表达均高于完全缓解组(PO．05)和对照组 (PO．05)，与缓解后复发组 比较 ，差异无统计 学意义(PO．05)。初治的AII骨髓 Smac表达 阳性 (Smac )患儿复发率 明显高于Smac表达 阴性 (Smac)患儿，差 异有统计学意义 (PO．05)。结论 ：提示在儿童 ALL的发生发展过程 中促凋亡基因Smac起着重要作用 ，并且检测 Smac基因可作为判断ALL患儿预后的因素 。 关键词 Smac；急性淋 巴细胞 白血病 ；儿童 中图分类号 ：R733．7 文献标识码 ：B 急性淋巴细胞 白血病 (ALL)是儿童常见 的恶 1．2．2 cDNA合成 性肿瘤 。研究表明，凋亡受抑是 白血病发病的主要机 反转录反应体系 30 L，包括细胞 总 RNA 3 制。促凋亡基因Smac在儿童急性 白血病 的发生发 ffL，50U／uLRnasin0．75／,L，50,／g／mL随机引物 展过程中起着重要作用 。我们通过对 5O例 ALL患 1．5,／L，10mmoldNTP3 L，5×反转录反应缓冲 儿的骨髓进行 Smac基 因的检测及分析 ，进一步探 液 6ffL，200U／ffLM—MLV反转录酶 1．5 L，余用 讨其在儿童 白血病发生和发展过程中的临床意义。 DEPC水补足 3O L。反应条件 ：37lC60min，94C 1 资料与方法 5min。cDNA在一80C冻存备用 。 1．1 一般资料 1．2．3 引物合成 Smac 选取我院 2008年 10月一2010年 12月经临床 上游 引物 ：5一ATAACCGCCAGGAATCAC一3； 及实验室明确诊断的AIL患儿 50例 (初治组)。其 下游引物：5一CCAAGGGCTAAGAACCAG一3，扩增 中，男 28例 ，女 22例 ，年龄 2～15岁。治疗参 照 产物长度为 381bp。内参照 13-actin引物 ：上游引物： 2006年 中华 医学会儿科学分会血液学组制订的标 5一AAACACCCCAGCCATGTACGT一3；下游 引物： 准 ]，50例均于化疗后达完全缓解 (完全缓解组)， 5一GTGGTGGT GAAGCTGTAGC一3，扩增 产 物长 其 中8例在缓解后 6～24个月 内复发 (复发组)，男 度 228bp。引物由上海生工生物技术有限公司合成。 5例，女 3例 。对照组来源于 2008年 10月 201O年 1．2．4 PCR扩增 12月我 院非恶性血液病患儿 (包括营养性贫血 、原 PCR反应体系为 25 L，包括反转录产物 1．5 发性免疫性血小板减少)25例 (对照组)，年龄 7个 “L，10×buffer2．5ffL，10mmol／LdNTP 1．0ffL， 月～16岁)。研究对象均抽取骨髓液 2．0mL。AIL 10pmol／t~L上、下游 引物各 1ffL，TaqDNA 聚合酶 患儿采用 VDLP方案诱 导缓解治疗 ，完全缓解 1．5U，其余用去离子水补足。Smac的扩增条件为 ：