发酵工程——菌种的衰退、复壮和保藏分析.pptx

菌种的衰退、复壮和保藏;①能在廉价原料上快速生长； ②生长条件易于掌控； ③对设备和操作方式适应性强； ④菌株生产性能稳定性强； ⑤产物产量高，积累浓度高； ⑥产物的回收容易； ⑦抗杂菌、抗噬菌体能力强； ⑧菌体不是病原菌。;(1)微生物保藏单位获取 (2)自然界分离 (3)野生菌株诱变 (4)基因重组 (5)动植物细胞; 性状稳定的菌种是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。;一、菌种的衰退;一、菌种的衰退; 菌种退化现象： 菌落颜色的改变，畸形细胞的出现等 菌株生长变得缓慢，产孢子越来越少直至产孢子能力丧失 菌种的代谢活动，代谢产物的生产能力或其对寄主的寄生能力明显下降 ;菌种退化的原因 菌种退化的主要原因是有关基因的负突变。突变在数量上的表现依赖于传代旺盛细胞，发生突变的机率比处于休眠状态的细胞大得多。 ; 菌种衰退的原因 1）基因自发突变（根本原因） 粘质赛氏杆菌（Serratia marcescens)H-2892 菌株生产力： 18g/L 组氨酸， 五次传代后菌株生产力：4g/L ; 2）变异菌株性状分离 随着菌种传代和核的分离也会使性状表现多样化，产量也会随之变化，即使是单核孢子发生突变时，如果双链DNA上仅一条链上某个位点发生变化，经移殖后也会出现性状分离。因此一个较稳定的变异株的获得必须经过多次分离纯化。;剂量 （以存活率计，%）; 3）传代次数的影响，使负突变株的比例逐渐占 了优势 个别细胞性状改变不足以引起菌种退化，经多次传代，退化细胞在数量上占优势，于是退化性状表现逐步明朗化，最终成为一株退化菌株。 ;实验;4）与培养条件有关的其它因素——温度、湿度、培养基成分及各种培养条件等。 如在保藏菌种中基因突变率就随温度降低而减少。 衰退是发生在微生物细胞群体中的一个由量变到质变的逐步演变的过程。;菌种退化的原因;二、衰退的防止与复壮 ;（一）防止退化的措施 前期育种时需注意 1.合理的育种，处理细胞用单核的，避免使用多核细胞； 2.增加突变位点，减少分离回复 ； 3.诱变处理后分离纯化，以保证保藏菌种纯； ;（1）控制传代次数 基因的变化往往发生在复制和繁殖过程中，繁殖越颇繁，复制的次数越多，基因发生变化的机会也就越多。因此应该尽量避免不必要的接种和传代，把传代次数控制在最低水平，以降低突变机率。 ;（1）控制传代次数 一般情况下，斜面每移植一代，霉菌、放线菌、芽孢杆菌在低温下可保藏半年左右，酵母可保藏3个月左右，无芽孢细菌可保藏1个月左右。为此，生产菌种每移植一代，最好同时移植较多的斜面，以供一段时间生产之需，这样移植次数就可减少。 ;（2）选择合适的培养条件 培养条件对菌种衰退有一定的影响，选择一个适合原种生长的条件可以防止菌种衰退。另外，生产上应避免使用陈旧的斜面菌种。 ;（3）利用不同类型的细胞进行传代 在放线菌和霉菌中，由于它们的菌丝细胞常含有许多核，甚至是异核体，因此用菌丝接种时就会出现衰退和不纯的子代。而孢子一般是单核的，利用孢子来接种，可以达到防止衰退的目的。但是这也必须注意到微生物细胞本身的特点。对构巢曲霉来说，利用它的分生孢子传代易发生衰退而用它的子囊孢子移种则不易退化。;（4）选择合适的保藏方法 采用有效的菌种保藏方法也可以防止菌种的衰退。 采用有效的菌种保藏方法 研究和制定出更有效的菌种保藏方法以防止菌种退化。 ;（二）菌种的复壮;纯种的分离方法 平板划线分离法 菌落纯 平板涂布分离法 平板倾注分离法 用“分离小室”进行单细胞分离 细胞纯 显微操纵器进行单细胞分离 菌丝尖端切割法进行单细胞分离;稀释分离法;显微操作： 单细胞分离;（二）菌种的复壮;举例： 产链霉素放线菌菌种分离（从退化菌种中筛选） ;三、 菌种保藏的原理和方法 菌种保藏的意义 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不致死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。;三、 菌种保藏的原理和方法 国内菌种保藏机构 1979年7月，我国成立了中国微生物菌种保藏管理委员会(China Committee for Culture C