12C6+离子辐射对细胞存活增殖及模拟失重和辐射对家蚕卵发育的影响论文.docVIP

　　12C6+离子辐射对细胞存活增殖及模拟失重和辐射对家蚕卵发育的影响论文 续惠云 罗明志 孟芮 张维 高翔 李文建 商澎 【摘要】 目的： 观察重离子辐射后人骨肉瘤细胞MG63、人胚胎皮肤成纤维细胞ESF1和人胚胎肝正常细胞HEL1的生存和增殖情况，及重离子辐射和模拟失重环境处理后家蚕卵的孵化和发育情况，初步探讨重离子辐射对细胞及复合环境对家蚕卵的一些生物学效应. 方法： 利用超导磁体模拟失重环境，利用重离子加速器产生12C6+离子，用不同剂量辐射细胞和家蚕卵，检测在重离子辐射后细胞的存活和克隆形成能力及复合条件下家蚕卵的发育情况. 结果： HEL1细胞在0.1 Gy时存活率已经开始降低，且随辐射剂量的增大这种影响也增加，到1.5 Gy时存活率降低50%. ESF1细胞在1.5 Gy时存活率下降约20%.freelL/L胎牛血清的DMEM培养液中，MG63细胞培养在含100 mL/L胎牛血清的MEM培养液中. 辐射前1 d将细胞接种在直径 35 mm的培养皿中，置于37℃, 50 mL/L CO2的培养箱中培养24 h后进行辐射. 1.2.2家蚕饲养蚕卵在温度25℃，相对湿度70%下孵化，孵化后，均在常规条件下饲养. 1.2.3重离子辐射重离子种类为12C6+，LET为49.3 keV/μm，剂量率为200 mGy/m，能量为45 MeV/A. 根据以前的一些实验结果，细胞的辐射剂量定为0，0.1，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，3 Gy. 家蚕卵随机分为两组，一组用0，0.25，0.5，0.75，1，1.5，2，5，10，15，20，30 Gy的剂量进行幅照后常规孵化，另一组在这些剂量辐射后放入超导磁体进行孵化. 1.2.4细胞存活实验辐射后细胞放置4 h，用40 g/L台盼蓝染色，分别对死活细胞进行计数，检测重离子辐射对三种细胞存活率的急性影响. 1.2.5细胞克隆形成实验辐射后将细胞稀释成单细胞悬液，按不同的预置数接种在Φ60培养皿中，培养10 d，固定染色后统计多于50个细胞的集落数. 细胞克隆生成率=(集落数/接种细胞数)×100%. 1.2.6家蚕卵孵化发育实验辐射后在25℃培养箱中孵化家蚕，计算其孵化率. 并将孵化出的蚕进行饲养，观察其生长过程和结茧时间，计算孵化率. 从孵化第12日开始称量家蚕幼虫体质量. 每2 d称量1次，每组随机称量30头，绘制生长曲线. 待蚕结茧后，称量茧质量（每组随机称量30个蚕茧）. 统计学处理： 所有实验数据都利用Prism 3.0软件采用t检验方法进行统计分析. 2结果 2.1重离子辐射对细胞存活率的影响HEL1细胞受到辐射的影响最大，在0.1 Gy时存活率已经开始降低，且随辐射剂量的增大这种影响也增大，到1.5 Gy时存活率降低50%，差异有统计学意义（P＜0.01）. ESF1细胞在1.5 Gy时存活率下降约20%，但差异无统计学意义，而MG63细胞的存活率在辐射后4 h时受到的影响很小（图1），差异无统计学意义. 图1重离子辐射对细胞存活率的影响 2.2重离子辐射对细胞克隆形成能力的影响与0 Gy时相比，HEL1细胞和ESF1细胞在0.1 Gy的辐射剂量时克隆形成的能力降低90.2%和79.1%，并随辐射剂量变化有一些波动，但其下降都在50%以上. 而MG63细胞一直保持比正常细胞更高的克隆形成能力，直到0.5 Gy才开始降低，并在1.5 Gy时迅速降低到未辐射细胞的25%（图2）. 图2重离子辐射对细胞克隆形成能力的影响 2.3重离子辐射对家蚕卵孵化和发育的影响辐射后家蚕的出蚁率都随着照射剂量的增大而降低，至30 Gy辐射剂量时，出蚁率降到2.22%（图3）. 当辐射剂量为0~10 Gy时，家蚕卵在两种不同重力条件下的孵化率差异无统计学意义. 但当辐射剂量增加到15,20，30 Gy时，失重环境与正常条件相比，明显促进了家蚕卵的孵化（P 0.05）. 另外，比较两种不同重力条件对家蚕孵化的影响发现，相同辐射剂量的时候，在磁体中发育的家蚕比磁体外发育的出蚁时间提前了3 d. bP 0.01 vs 模拟失重组. 图3重离子辐射对家蚕卵孵化率的影响 家蚕发育实验的结果显示，在失重和常重力两种条件下，重离子辐射对家蚕生长有影响，但差异无统计学意义（图4）. 两种重力水平下均表现出随辐射剂量的增加，家蚕生长的减慢. 低剂量的重离子辐射对家蚕幼虫的生长影响不明显，但随辐射剂量增加到10 Gy，辐射组家蚕与对照组相比生长减慢，且随着照射剂量的增加，影响程度加大（图5，失重条件下数据未显示）. 蚕茧称量的结果显示，不同的辐射和重力水平对茧重的影响不明显. 但重离子辐射能造成家蚕结茧时间的