CMV感染病儿实时荧光定量PCR检测及意义论文.docVIP

　　CMV感染病儿实时荧光定量PCR检测及意义论文 刘薇蒋玉红，孙佰秀，李海峰，罗兵 【摘要】目的探讨实时荧光定量PCR法检测病儿尿液中巨细胞病毒(CMV）DNA含量在诊断和动态监测CMV感染中的意义。方法应用PE5700全自动PCR扩增分析仪，检测35例临床高度怀疑有CMV感染病儿（病儿组）尿液中的CMVDNA拷贝数,随机选择45例同年龄段患非感染性疾病病儿作为对照组,比较两组CMV阳性标本中CMVDNA含量，并测定治疗后的病毒载量。同时与血清CMVIgM抗体检测结果进行比较。对部分病儿进行临床观察和随访。结果病儿组CMV感染27例,阳性检出率为77.14%;对照组CMV感染12例,阳性检出率为26.67%。治疗后两组病儿尿液中CMVDNA拷贝数下降幅度均较大,与治疗前比较,差异有显著性（t=4.159、5.438，P 0.01）。实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率高于血清CMVIgM检测方法。9例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化；4例CMV肝炎经治疗后,1例CMVDNA转阴，3例仍阳性；4例无症状性感染病儿CMVDNA转阴或降至低水平。结论实时荧光定量PCR技术检测CMV感染具有快捷、灵敏度高、特异度高等优点.freelL送检。试剂由深圳匹基生物有限公司提供,仪器为美国PE公司PE5700基因扩增仪，扩增结束后拷贝数小于106/L为阴性，拷贝数大于106/L为阳性，并由仪器根据标准曲线自动计算出定量结果。 1.2.2血清CMVIgM抗体检测采集小儿非抗凝静脉血2mL，分离血清置4℃保存，采用美国HOPE公司生产ELISA试剂盒检测血清CMVIgM抗体。 1.3治疗方法 症状性感染组病儿一经确诊有CMV感染，立即给予更昔洛韦10mg／（kg·d）加入50g/L葡萄糖注射液100～200mL中静脉滴注，连用10d为1个疗程，同时辅以保肝药物如维生素C、肝复肽等治疗。根据病情和肝功能、CMV病毒载量的复查结果决定治疗疗程。无症状性感染组病儿用更昔洛韦抗病毒治疗1个疗程。 1.4随访 症状性感染组和无症状性感染组病儿分别于治疗后半年、1年和2年监测肝功能和CMV病毒载量，并应用无创性超声观察小儿的肝脏形态学、血流动力学相关指标改变及肝脏是否有纤维化。 1.5统计学方法 用SPSS11.5统计软件进行数据处理，CMVDNA拷贝数以指数表示（log10）x。计量资料组间比较采用t检验，计数资料比较用χ2检验。 2结果 2.1实时荧光定量PCR法检测 病儿组CMV阳性者（症状性感染）27例,占77.14%；对照组CMV阳性者（无症状性感染）12例,占26.67%。与治疗前比较，两组治疗后CMVDNA拷贝数指数下降幅度均较大,差异有显著性（t=4.159、5.438，P 0.01）。治疗前、治疗后两组间CMVDNA拷贝数指数比较，差异均有显著性（t=2.454、2.432，P 0.05）。见表1。 2.2两种方法的检测结果比较 实时荧光定量PCR法CMV阳性检出率为48.75%(39/80),血清CMVIgM检测方法CMV阳性检出率为13.75%(11/80)，前者阳性检出率高于后者。 2.3随访结果 9例病儿随访2年,1例胆管闭锁病儿手术后CMV病毒载量仍在较高水平,1年后发展为肝硬化；4例CMV肝炎病儿治疗后,1例CMVDNA转阴，3例CMVDNA仍阳性，其中1例预后不良，3例预后良好；4例无症状性感染病儿CMVDNA转阴或降至低拷贝水平。 表1症状性感染组与无症状性感染组治疗前后CMVDNA拷贝数指数比较（略） 与治疗前比较，t=4.159、5.438，P 0.01；与无症状性感染组比较，#t=2.454、2.432，P 0.05 3讨论 CMV属疱疹病毒类,具有潜伏活动的生物学特征。CMV感染的流行病学研究表明,约有3%的新生儿在出生时就已感染CMV,表明该病毒可经胎盘感染胎儿3，造成胎儿严重疾病的感染通常发生在妊娠的最初12周内4。CMV感染在我国流行广泛,胎儿及免疫力低下的小病儿易受侵害,临床表现与年龄有关,年龄大者感染CMV后临床症状轻,可表现为无症状性感染；胎儿期和围生期发生的CMV感染临床症状较重,表现复杂，可造成先天性脑白质发育不良,某些病例预后差,有致残、致死的可能5。本文中5例临床表现严重的病儿均在出生后2月内发病,3例为早产儿,1例胆管闭锁病儿最终发展为肝硬化。因此，及早诊断CMV感染并系统性治疗能减少并发症的发生，病儿预后良好。 本文对CMV感染病儿随访2年，有9例资料完整，其中1例胆管闭锁病儿于出生后2周发病，总胆红