利用大蒜根尖制作植物细胞有丝分裂装片.docVIP

利用大蒜根尖制作植物细胞有丝分裂装片 付小艳， 中学生物教学， 在教学实践中作者曾选用过许多材料(洋葱、水稻、葱、大蒜等)做“植物细胞有丝分裂”实验，通过大量实验证明大蒜是作为该实验研究的好材料。利用自己动手制作的“大蒜根尖纵切片”永久切片，让学生观察植物细胞有丝分裂效果很好。实验具体操作如下： 1.材料 大蒜根尖。 2.用具 显微镜、解剖盘、草纸、载玻片、盖玻片、刀片或切片机。 3.药品 离析液、醋酸洋红或醋酸地衣红、铁苏木精甲液(媒染剂)、酒精、桑弗利斯固定液。 4.方法步骤 (1)幼根培养。选取新鲜饱满的蒜瓣，剥去膜质鳞被，用细竹签将蒜瓣穿成串，放在盛有水的解剖盘内，使蒜瓣的基部与吸透水的草纸接触，并用1层～2层吸水纸盖上，置于温暖处(24℃～25℃)或培养箱中，保持一定的水分，3天～5天后在蒜瓣基部则可长出洁白的幼根。 (2)掌握取材时间。待根生长到1cm～1.5cm时，切取3个～5个根尖，放入浓盐酸与95%的酒精等量混合液中，离析5min～6min后，用蒸馏水清洗数次，置于干净的载玻片上，用刀片切去根冠和伸长区，留下分生组织，将其纵切成数片，用1滴～2滴醋酸洋红(或醋酸地衣红)染色5min，盖上盖玻片，用拇指腹部对准盖玻片下的材料轻压，使其分散成粉状，置于显微镜下观察。经过反复实验，认为在室温24℃时，中午11时～13时取材较好，尤其在11时与12时之间分裂期细胞最多。 (3)材料的处理与固定。在根尖细胞分裂旺盛期将培养的大蒜根尖全部切下，投入蒸馏水内稍加摇动使其下沉并放入0℃～5℃的冰箱内低温处理30min后，用桑弗利斯固定液固定4h～6h，经流水冲洗6h～12h，以清除材料中的固定液。 (4)脱水与透明。将材料经30%、50%、70%、85%、95%的各级酒精逐级脱水30min至1h(视材料在固定液中时间长短而定)，转入100%的1号、100%的2号酒精各脱水15min，再经过纯酒精与二甲苯等量混合液和纯二甲苯1号、2号各30min处理直至透明为止。 (5)包埋切片。将透明的根尖材料，从纯二甲苯中取出，入二甲苯饱和石蜡中浸30min，经熔点为52℃～54℃、54℃～56℃、56℃～58℃的石蜡各30min包埋后用切片机切成5μm～6μm的石蜡切片，再进行展片、贴片、烘片。 (6)脱蜡入水。将烘干的切片放入盛有二甲苯1号、2号中各脱蜡10min，转入纯酒精与二甲苯混和液3min～5min，再经100%、95%、85%、70%、50%、30%的各级酒精1min～2min，最后入蒸馏水4min～5min进行脱蜡入水。 (7)染色。将入水后的切片，在新鲜铁苏木精甲液中先媒染30min，经蒸馏水分色到镜检胞核清晰为止。最后再经蒸馏水过一次。 (8)脱水。把染色的切片入30%、50%、70%(可在此浓度酒精中再次镜检效果)、85%、95%的各级酒精中进行脱水各2min～3min，100%1号、2号酒精中各脱水10min(100%1号、2号酒精塞要更换干燥的，以免有水分渗入)。 (9)透明后封藏。将脱水后的切片入纯酒精与二甲苯的等量混合液5min，纯二甲苯1号、2号各透明10min，最后用鸡蛋清封藏切片。 5.优点 (1)取材最佳时间的确定，能确保切片的成功，在一张切片中能清晰地观察到植物细胞有丝分裂各时期的特点。 (2)用铁苏木精染色，有利于增大反差，便于观察。 (3)低温处理用蒸馏水而不用秋水仙素等贵重药品，这样既能节约资金，又利于身体健康。同样能取得良好效果。 (4)通常封片用的中性树胶粘合剂，在普遍中学实验室里不易找到，市面上也不易买到。我在实验中用鸡蛋清替代中性树胶粘贴盖片效果较好。因为鸡蛋清与中性树胶成分大致一样，都是蛋白质胶体，稀薄透明细腻。 (5)大蒜材料易得，加之染色体数目少而形大，易于观察，制片过程容易掌握，在常规切片方法的基础上将材料的处理方法加以改进，即能获得大量的植物细胞有丝分裂的清晰图像，使实验效果更佳。 该实验过程中还必须注意脱水这一关键步骤。脱水的目的是使组织中的水分完全除去，并使组织变硬，各种材料经固定与冲洗后，组织中就含有大量水分，而材料又逐渐变软，不能直接投入石蜡中包埋。因为水和石蜡是不能溶合的。一定要将水分脱净才能进入包埋阶段;若脱水不干净，就会影响效果，甚至完全失败。