20071030-感受态细胞的制备和连接产物转化克隆菌株.pptVIP

QA 关于对照 关于酶切，连接 感受态细胞的制备 连接产物转化克隆菌株 * 基因的克隆与表达专题之四 无菌 轻柔 冰浴 制备感受态细胞流 程 预 培 养（昨天下午）： LB培养基（3mL，含12.5μg/mL Tet）37 ℃ 、190rpm振荡培养过夜 扩大培养(今天早晨）： 0.4mL预培养菌液＋  40mL LB液体培养基（含12.5μg/mL Tet）  37 ℃ 、250rpm振荡培养2.5-3小时 NovaBlue 配制液体并高压 LB液体培养基 140mL 胰蛋白胨（typtone) 0.8g 酵母提取物（yeast extract) 0.4g NaCl 0.8g先加80mL水溶解后，再加16μL 5mol/L NaOH。分装40mL到250mL锥形瓶（2瓶），其余分装到大试管中（4mL/管×14管） 2. LB固体培养基 200 mL LB液体培养基中含1.2％的琼脂，灭菌后待温度降到60℃左右，加入50 μ g/mL Carb、12.5 μ g/ mL Tet 、70 μ g/mL X-gal和80 μ mol/L IPTG混匀（均为终浓度）,立即铺平板10块 3. 0.1mol/L的CaCl2 100mL／两组 收集细