大豆种皮特异性启动子的克隆及功能分析.pdfVIP

第 29卷 第 3期 大 豆 科 学 Vo1．29 NO．3 2010拒 6月 SOYBEAN SCIENCE Jun． 2010 大豆种皮特异性启动子的克隆及功能分析 魏雯雯，王丕武，付永平，张 卓 (吉林农业大学 农学院，吉林 长春 130118) 摘 要：采用PCR技术从大豆品种吉农 l7基 因组 DNA中分离得到大豆种皮特异性启动子片段 SCSP，长度约为 1268bp。序列分析表明SCSP与报道序列同源性达 97％以上。将其与 GUS基 因融合 ，构建植物表达载体 pSCSP— GUS后 ，转化到 EHA105根癌农杆菌 中，通过根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)介导法转化烟草 (Nicotiana tabacum)NC89。转基因植株的GUS活性检测表明，仅能在种皮检测到 GUS活性，而在茎、叶和花等其它组织 中都 未检测到 GUS活性 ，证实 SCSP片段具有种皮特异性表达功能 。 关键词 ：大豆 ；种皮特异性启动子 ；功能分析 ；GUS染色 中图分类号：$565．1 文献标识码 ：A 文章编号：1000-9841(2010)03·0390—04 CloningandIdentificationoftheSeedcoatSpecificPromoterfrom Soybean WEIW en—wen，WANG Pi·WH，FU Yong-ping，ZhangZhuo (CollegeofAgriculture，JilinAgriculturalUniversity，Changchun130l18，Jilin，China) Abstract：ThepromoterregionofSeedcoat—specificgenewasisolated from thegenomicDNA ofsoybeanJilin 17byPCR method，andobtainedthepromoterfragmentSCSP，thelengthoftheclonesequenceis1268bp．Sequenceanalysisindicated thatthis~agmentbad97％ homologycomparedwiththereportedpromoters．TheclonedpromoterwasfusedtotheGUSre— portergenetoconst_ructplantexpressionvectorpSCSP—GUS，whichwastransferredintotobacco(Nicotianatabacum)NC89by Agrobacterium tumefaciens—mediatedmethodandseveraltransformedplantswereobtained．GUSactivityassaysofdifferent soybeanorgansindicatedthatexpressionofGUSwasactiveonlyinseedcoat，whichsuggeststheSCSPgeneisseedcoat-speciG iepromoter． Keywords：Soybean；Seedcoatspecificpromoter；FunctionalIdentification；GUSstaining 启动子是 DNA分子与 RNA聚合酶特异结合的 同一种启动子驱动2个或 2个以上的外源基因可能 部位 ，是最主要的一种转录调节因子 ，对于外源基因 引起基因沉默或共抑制现象 。为了使外源基 因 的表达非常重要。在基因表达的调控 中，转录的起 在植物体内有效发挥作用 ，又减少对受体植物的不 始是个关键。某个基因是否表达决定于特定 的启动 利影响，人们开始越来越多的研究组织器官特异性 子的起始过程 。在采用分子生物学手段对农作物进 启动子 。种皮特异性启动子就是这类启动子 ，它 行遗传改良的过程中，常希望插入的外源基因能够 可调控种皮表达系统改变种皮颜色 ，也可以提高所 限定在特定的组织 中表达，从而使植物获得有益的 需要元素的表达量，还可以使外源基因在种皮表达 性状而不影响其它特性 ，这