转基因小麦后代外源目的基因的遗传分析.pdfVIP

第 25卷 第 6期 干 旱 区 研 究 V01．25 No．6 2OO8年 11月 ARID Z0NE RESEARCH Nov． 2oo8 文章编号 ： 1001—4675(2008)06—0808—04 转基因小麦后代外源 目的基因的遗传分析 祝长青 ， 赵惠新 ， 李艳红 ， 覃建兵 (新疆师范大学生命科学与化学学院分子生物学研究室，新疆 乌鲁木齐 830054) 摘 要：采用PcR和 sDs—PAGE技术，分析了转基因小麦后代外源基因lDx5的遗传分离及表达规律。结果显示： 外源 目的基因lDx5在转基因小麦后代中完全符合孟得尔遗传分离规律 ，稳定遗传都达到了纯合状态，并在后代中 发现了该 目的基因超表达的差异表达现象，转基因植株不存在基因沉默。 关键词：转基因植株；目的基因；超表达；基因沉默 中图分类号：S5l2．1 文献标识码 ：A 小麦是世界上种植面积最广、生产量最高的重 1 材料与方法 要粮食作物，是人类蛋白质主要摄取来源 ¨。通过 转基因手段 ，及时加强转基因优质小麦的研究及产 1．1 实验材料及背景 业化推广工作 ，不仅会产生巨大的经济效益 ，也将带 转 lDx5基 因小麦 B72．8．11b和 B73．6．1由本 来良好的社会效益。 研究室合作单位华 中科技大学中英联合实验室提 转基因植株的后代分析鉴定，不仅是直接检验 供，其中T5及 T6种子直接来源于通讯作者博士论 文工作 J。IJ88—31和 L88．6同属近等基因系，其 lA 转化效率、转化技术和转化条件的最有效手段，而且 和 1D染色体上的蛋 白质亚基基 因属于无效基 因， 是研究外源基因在转化后代中的整和、遗传分离组 其仅仅表达蛋 白亚基 lBxl7+1By18，L88-l5的Clu— 合 、表达规律等方面的基础 ；更重要 的是对转化品系 A1，Glu—B1和 Glu．D1位点可分别编码蛋 白质亚基 的实际应用价值的判定和将具有优良农艺性状的其 1Ax1，1Bx17，lBy18，1Dx5和 1Dy106。。 他外源基因的成功转化，以及转化后的整合、表达规 1．2 方法步骤 律和应用提供理论和技术依据 。对小麦面包烘烤品 1．2．1 总DNA的提取 采取三叶期幼嫩叶片(长 质具有重要影响的高分子量麦谷蛋 白亚基基因的遗 6～8cm)，总 DNA的提取采用 cTAB法，提取方法 传转化T作虽然已有报道 ，但对转化后代的研究 是 Mumy和 rrhomps0n方法的改进 。 报道还不多 ，尤其是 目的基因的数量遗传特性分 1．2．2 1Dx5基 因的PCR扩增 外源 目的基因PCR 析和检测还未见报道。 检测正反引物序列分别为：5。GAAACCTCCTGcGGA． 高分子量麦谷蛋 白亚基基因 1Dx5的转基 因研 CAAG-3，5一GCcTAGcAACCTTCACAATC一3，退火温 究一直是小麦基 因工程研究的热点，因为 1Dx5亚 度60℃。 基被证明是增强面筋弹展性 、改 良面包烘烤品质的 1．2．3