尖角突脐胞菌粗毒素的研究初报.pdfVIP

科技创新与绿色植保 尖角突脐胞菌粗毒素的研究初报’ 郑 伟 陈 勇.，黄 韵 (华南农业大学南方草业中心 广州510642) 摘 要:从尖角突膝抱的培养滤液及菌丝中，用乙酸乙醋提取出了该菌的粗毒素。经生测 试验表明，提取的粗毒素时一叶期低龄稗草的抑制效果很好，乙酸乙醋可以从培养滤液中提取 出大部分的毒素。这为大批量生产尖角突脐抱毒素莫定了基础。 关键词:尖角突膝抱菌;粗毒素;乙酸乙醋;稗草 尖角突脐抱菌 吓流￡erohulimnolnoce ras)作为防除重要稻田杂草稗草 (及几inohcola c几绍galli)的真菌除草剂已被详细的研究。目前，日本和国际水稻研究所正在将其商品 化z][。在我国，陈勇、倪汉文等从1996年开展尖角突脐抱防除稗草的研究，并测定了它 对稗草的致病性和对作物的安全性，显示了该菌具有极大的潜力[’“’]’[]。 通常，生产真菌除草剂多是利用真菌的抱子。但活的生物体作为除草剂有很大的限制 因素，如对环境条件要求苛刻，制剂加工困难等’〔〕‘。生物除草剂的寄主专一性常与寄主 专一性植物毒素的产生有关vJ[，关于寄主专一性植物毒素的深人研究，有可能启发人们 研制开发选择性良好的生物源化学除草剂。王建华2002年研究了尖角突脐饱菌产毒的最 佳条件’”〔〕。那么能不能把毒素从发酵液中有效的分离出来呢?如果分离出来，就有可能 搞清楚其化学成分，代谢机理及其基因调控的机制，为开发便于应用的生物源除草剂打下 良好的基础。本试验就是以乙酸乙醋为萃取剂，对尖角突脐抱粗毒素的分离作了一些初步 的探讨。 1 材料 无芒稗 (Ec人inoc人ola。二一邵lliL.var.mitis(Purhs)petem)，由华南农业大学南方 草业中心提供。挑选颗粒饱满、大小均一的种子，测定发芽率为98%。稗草种子用纯净 水预浸42h，洗净后用1%的次氯酸钠表面消毒3mni，置35℃条件下催芽至露白，备用。 尖角突脐胞培养液:菌株代号X27的尖角突脐抱菌，在PDA(马铃薯葡萄糖琼脂培养基) 平板上，温度82℃，连续黑暗的培养箱中培养1周。培养皿直径9一IOcm.培养基厚度 0.6cm。1周后，用打孔器从平板上打取直径0.4cm的菌块，无菌条件下，将其接种到PD 培养液 (马铃薯葡萄糖培养基)中，三角瓶容量500耐，每瓶盛有205耐的培养液。置 82℃，02oprm条件下，振荡培养7天。 ·基金项目:除稗真菌毒素及其杀草生理生化机理研究 C0202肠07国家基金资助);尖角突脐抱菌除 稗活性物质及其除草作用机制 (063创拼11，广东省基金资助)。 作者简介:郑伟，男，硕士，Tel:020 。。通讯作者:陈勇，E一hal:hcenynog@cs既de比nc 研究论文 2 方法 2.1尖角突脐抱培养滤液对稗苗抑制效果的测定 将培养液用四层纱布过滤，再用滤纸过滤3次。经镜检，确定滤液中不含抱子，即为 培养滤液原液。菌丝60℃下烘干，每过滤出SOOml滤液得到的菌丝为1份，备用。培养 滤液500而为1份。分别取培养滤液4份，用旋转蒸发仪将体积分别浓缩至25耐、05耐、 100而、250耐，也就是原体积的/102、1/01、1/5、1/2 四种，1/20浓缩液、1/l0浓缩 液、1巧浓缩液、1/2浓缩液、滤液原液和对照PD培养液分别记为A一1、A一2、A一3、 A一4、A一5、A一6。取露白的稗苗，放在铺有一层滤纸的内径gcm的培养皿内，分别用 3ml的A一1、A一2、A一3、A一4、A一5、A一6润湿滤纸。试验期间，保持滤纸的湿润。 每个处理设4个重复。sd后，测量并记载胚芽和胚根的长度，计算抑制率。 2.2 尖角突脐抱培养滤液的粗毒素对稗苗抑制效果的测定 将培养滤液4份，分别用乙酸乙醋按1:3比例萃取，将乙酸乙醋蒸干，得黄色脂状 物，分别加无菌水25ml、05耐、loonli、250祖配成溶液，分别记为B一1、B一2、B一3、 B一4。将无菌水和乙酸乙醋按13:比例混合，将乙酸乙醋蒸干，设为对照，记为B一5。 取露白的稗苗，放在铺有一层滤纸的内径gcm的培养皿内，分别用3ml的B一1、B一2、 B一3、B一4、B一5润湿滤纸。试验期间，保持滤