《细胞生物学实验》指导.docVIP

细胞生物学实验 编写老师 张相锋 生物科学实验教学示范中心 细胞生物学实验指导 3 实验一、显微镜的技术参数及特殊光镜的演示实验 4 实验二 测微尺的使用及细胞大小的测量 9 实验三：血涂片制备及瑞氏染色显示白细胞 11 实验四 血细胞的计数 13 实验四 血细胞的计数 14 实验五 线粒体的超活染色与观察 17 实验六、Brachet染色法显示RNA 18 实验六、Brachet染色法显示RNA 19 实验七、PAS法显示多糖 21 实验八、染色体玻片标本的制作 24 实验九、植物细胞骨架的光镜观察 27 实验十、活细胞观察与死、活细胞鉴别 30 实验十一、动物细胞微丝束的光镜观察 31 实验十二、细胞凝集反应 33 细胞生物学实验指导 一、实验课名称：细胞生物学实验 Experiment of Cell Biology 二、实验课性质：独立设课 三、适用专业：生物科学 四、采用教材及参考书： 参考书：1. 杨汉民主编．细胞生物学实验（第二版）．北京：高等教育出版社，1997.7 2. 徐承水，党本元主编．现代细胞生物学技术．青岛：青岛海洋大学出版社，1995 3. 王金发主编．细胞生物学实验教程．北京：科学出版社，2003 五、学时学分：课程总学时：36； 课程总学分：1 六、实验项目名称和学时分配 序号 实验项目名称 学时 分配 实验 属性 实验 类型 实验者 类 别 每组 人数 必开/ 选开 1 显微镜的技术参数及特殊光镜的演示 3 专业类 演示 本科/专科 20 必开 2 测微尺的使用及细胞大小的测量 3 专业类 验证 本科/专科 20 必开 3 血涂片制备及瑞氏染色显示白细胞 3 专业类 验证 本科/专科 20 必开 4 血细胞的计数 3 专业类 验证 本科/专科 20 必开 5 线粒体的超活染色与观察 3 基础类 验证 本科/专科 20 必开 6 Brachet染色法显示RNA 3 基础类 验证 本科/专科 20 必开 7 PAS法显示多糖 4 专业类 验证 本科/专科 20 必开 8 染色体玻片标本的制作 6 专业类 综合 本科/专科 20 必开 9 植物细胞骨架的光镜观察 5 专业类 综合 本科/专科 20 选开 10 活细胞观察与死、活细胞鉴别 3 基础类 验证 本科/专科 20 选开 11 动物细胞微丝束的光镜观察 5 专业类 综合 本科/专科 20 选开 12 细胞凝集反应 3 专业类 验证 本科/专科 20 选开 实验一、显微镜的技术参数及特殊光镜的演示实验 一、实验要求 了解普通光镜及各种特殊光镜的构造、成像原理及应用；掌握正确的使用方法；理解显微镜的技术参数和特殊光镜的结构特点；掌握实验报告的写法。 二、实验内容 普通光学显微镜的结构及技术参数：由光学和机械两大系统构成。 1、光学系统及成像原理： （1）光学系统的构成：物镜、目镜、聚光器、光源部件等 （2）成像原理：根据透镜成像的原理，对微小物体进行放大（二次成像）。当被检物体放在物镜前方的1－2倍焦距之间，光线通过物镜在镜筒中形成一个倒立的放大实像，这个实像恰好位于目镜的焦平面之内，通过目镜后形成一个放大的倒立虚像。通过调焦装置使A2B2落在人眼睛的明视距离（25mm）处，使眼睛看到的物体最清晰。 2、机械系统：（从下往上） （1）镜座－位于最底部，是整台显微镜的基座，用于支持和稳定镜体。有的在镜座内装有照明光源； （2）载物台－也称镜台，位于物镜转换器下方的方形平台，用于放置被观察的玻片标本。中央有圆形的通光孔，来自下方的光线经此折射到标本上。 （3）镜臂－支持镜筒和镜台的弯曲状结构，是取用显微镜时握持的部位。 （4）调焦螺旋－调节焦距的装置，可使载物台升降，调好焦距，使物像呈现在视野中。 （5）物镜转换器－装载不同放大倍数的物镜。转动旋转盘可使不同物镜达到工作位置（与光路合轴），使用时注意凭手感使所需物镜准确到位。 （6）镜筒－上端装有目镜，下端与物镜转换器相连物镜转换器。 3、显微镜的技术参数： （1）分辨率（resolution）：指在25CM的明视距离处能区分开被检物体上两个相近质点的最小距离（显微镜能将邻近的两个质点分辨清楚的能力）。 R=0.61λ/N.A =0.61λ/n·sin(α/2) λ-照明光线波长； N.A－物镜的数值孔径；n为介质的折射率；α为镜口角。 思考：如何提高显微镜的分辨能力？ 通常2θ最大值可达140°，θ角最大为70， Sin70°=0.94；λ一般0.45μm（蓝色光），由公式可知当λ和Sin值均不变时，介质折射率n越大，能区分的二点之间的距离就越短，物镜的分辩率越好。 n=1（空气中），分辨率R=0.29um； n=1.52（油镜下）R＝0.