一种多拷贝毕赤酵母表达载体的构建与人脑源性神经营养因子的表达.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’( )! 1’ ) # 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,-./-0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 一种多拷贝毕赤酵母表达载体的构建及 人脑源性神经营养因子的表达 梁伟锋 张朝春 杨希才 （中国科学院微生物研究所 北京 #%%%3% ） 摘 要：利用EFG 技术扩增出HEIF@J 载体的KIL!5J/: 序列片段，与HEIFM 重组，构建结合了两个载体特点的适合 ! 体外构建多拷贝基因表达盒的毕赤酵母表达载体HEIFM #，改造后的载体含 KIL!5J/: 序列，能整合到酵母染色体 ! 上，具有筛选方便、外源基因多拷贝组建迅速、蛋白产物分泌表达和易纯化等优点。将人脑源性神经营养因子 （ ）的 （ ）克隆入载体 ，利用同尾酶 、 不可逆连接方式，分别构建含有 、、、 CNO1* =O1P 6A,H HEIFM # !# !$%K # $ 6 4 ! # 个拷贝CNO1* 表达盒的重组表达载体，电击法转化毕赤酵母QL## 菌株，用Q!#3 和M+’=9: 筛选转化子，筛选到的 阳性转化子用% R S 甲醇诱导，获得分泌型表达。表达产物类似于天然神经营养因子单体大小、分子量约 #!TO。 多拷贝 表达盒的表达水平亦高于单拷贝 表达盒， 和 检测表明：表达的蛋白能与鸡 CNO1* CNO1* 7UILP V+?D+-: ,(’D 抗人脑源性神经营养因子抗体特异结合，证实该表达蛋白具有CNO1* 的免疫原性。 关键词：多拷贝表达载体，人脑源性神经营养因子，毕赤酵母，分泌表达 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） WA34 P %%%#54$%@ $%% %#5%%6!5% 、 、 是 公司开发 病的改善和治疗方面的作用也在动物试验与人体试 HEIF@J HEIFM!HPX3# I:Y9D-’;+: ［ ］ 的系列载体，各有其特点，适合不同的外源基因克隆 4 ] 3 验得到验证 ；与其他神经营养因子的协调作用 策略，适合体外构建多拷贝的载体HPX3#，没有形 的机制研究也在进展中，因此，随着研究、了解的深 ［］ @ 成信号肽功能的 因子基因序列，属于胞内表达载 入， 的应用前景变得十分光明 ，由于天然 !