加味茵陈五苓散对免疫性肝损伤保护作用及其机理研究论文.docVIP

　　加味茵陈五苓散对免疫性肝损伤保护作用及其机理研究论文 马小娟， 颉东升， 何国梁 【摘要】 目的观察加味茵陈五苓散对免疫性肝损伤的保护作用以阐明其药效和药物作用机理。方法采用卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)诱导小鼠免疫性肝损伤模型，观察本方对肝损伤小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)及谷草转氨酶(AST)活性，脾、肝脏器系数，肝脏病理组织学损伤程度的影响，并检测小鼠肝组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量，血清一氧化氮(NO)含量及肿瘤坏死因子(TNF-α)的含量。结果加味茵陈五苓散和阳性对照药物五酯片均能显著降低BCG/LPS免疫性肝损伤小鼠血清中升高的ALT、AST水平;且加味茵陈五苓散中剂量降酶作用优于阳性对照组;对肝脾重量的增大有显著的抑制作用;组织病理检查结果显示本品中、高剂量可减轻肝组织坏死范围及程度.freelmunological liver injury in mice induced by BCG+LPS and its mechanism. MethodsModified YinChenodified YinChenodified YinChenodified Yinchenodified YinchenDA)测定试剂盒，批号超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒，批号蛋白测定试剂盒(考马斯亮蓝法)测定试剂盒，批号一氧化氮NO测试盒(硝酸还原酶法)，批号为南京建成生物工程研究所产品;TNF-α试剂盒为晶美公司产品，批号 1.4 仪器与设备 TDZ4-DA与SOD水平测定 取肝脏约0.5 g，用冰冷生理盐水漂洗，除去血液，滤纸拭干，称重，在冰浴盒上剪碎，用生理盐水配成10%肝组织，使用匀浆器制备肝组织匀浆，低温离心取上清液，按试剂盒说明书所述方法用紫外可见分光光度计测定肝匀浆中SOD，MDA含量。 2.2.4 血清NO及TNF-α含量测定 取血清0.1ml按试剂盒说明书所述方法用测定血清NO含量;另取血清0.1ml按试剂盒说明书所述方法检测TNF-α(ELISA法)。 2.2.5 肝组织病理学观察 取各组小鼠肝右叶同一部位，用10%甲醛固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察各组肝脏组织病理变化情况。 2.3 统计学处理 计量数据均以±s表示，以t检验进行组间比较。 3 结果 3.1 小鼠一般情况及小鼠死亡率 正常对照组皮毛保持光滑亮泽，饮食正常，喜活动，体重增长正常，无1例死亡;模型对照组皮毛逐渐干枯稀疏，精神不振，体重较造模前增加不明显，进食与活动均明显减少，造模后死亡数量较多，死亡率达33.3%。加味茵陈五苓散高中低剂量组小鼠皮毛尚可，饮食及活动情况基本接近正常组，体重增加情况较正常组略低于正常组而优于模型组，死亡率分别为6.7%，6.7%和20%，低于模型组;五酯片组小鼠皮毛、饮食较正常组差，精神状态及活动情况尚可，体重增加情况好于模型组，死亡率为10.3%。 3.2 加味茵陈五苓散对免疫性肝损伤小鼠血清ALT，AST的影响 表1结果表明，与正常对照组相比较，模型组小鼠血清ALT，AST水平均明显升高(P 0.01)，表明BCG+LPS染毒后对小鼠肝细胞造成了严重的损伤;与模型组比较，加味茵陈五苓散高、中剂量组ALT值显著降低(P 0.01)，高、中剂量组AST值显著降低(P 0.01)，说明加味茵陈五苓散能减少肝细胞内酶的逸出，对肝细胞有较明显的保护作用;其中中剂量组效果更为显著，低剂量组降酶作用不明显;与阳性对照组比较，低剂量组疗效不及阳性组，中、高剂量组疗效与阳性组接近，无显著性差异。表1 加味茵陈五苓散对免疫性肝损伤小鼠血清ALT，AST的影响 模型组与正常对照组比较，*P 0.05，**P 0.01;与模型组比较，△P 0.05，△△P 0.01;各治疗组与阳性对照组比较，#P 0.05，##P 0.01 3.3 加味茵陈五苓散对免疫性肝损伤小鼠脏器系数的影响 表2结果表明，模型组小鼠肝、脾系数明显高于正常对照组(P 0.01)。加味茵陈五苓散高、中剂量组均有抑制肝脾增大的作用，与模型组对比差异显著(P 0.05或P 0.01)。而低剂量组与阳性对照组未见这一作用。表2 加味茵陈五苓散对免疫性肝损伤小鼠脏器系数的影响 模型组与正常对照组比较，*P 0.05，**P 0.01;与模型组比较，△P 0.05，△△P 0.01;各治疗组与阳性组比较，#P 0.05，##P 0.01 3.4 加味茵陈五苓散对BCG+LPS诱发的小鼠肝损伤组织MDA含量和SOD 活性的影响表3结果表明，模型组小鼠肝匀浆 MDA含量明显升高(P 0.01)，SOD水平明显降低(P 0