白僵菌侵染黄粉虫实验步骤.docVIP

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2017-06-14 发布于河南
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白僵菌侵染黄粉虫实验步骤.doc

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白僵菌侵染黄粉虫实验步骤

菌悬液的制备施药处理白僵菌侵染黄粉虫的实验步骤 1、将-4℃保存的白僵菌25±1℃、相对湿度80%±10%下用PDA培养基扩繁培养7天左右。 2、待完全产孢后，用含0.1%吐温80湿润剂的0.003 mol/L KH2PO4缓冲液将分生孢子粉湿润、洗脱，磁力搅拌器搅拌混匀，并过滤除去菌丝和杂质。 3、用血球计数板在显微镜下计数孢子数，测出其浓度，再用无菌水分别稀释成孢子浓度梯度为109、108、107、106、105个/mL的悬浮液备用。 4、采用浸渍法将黄粉虫虫体浸入孢子悬浮液中1秒，对照组浸渍无菌水处理。 5、浸渍后放于灭菌滤纸上爬行尽快吸干其身上多余的悬浮液，吸干后把试虫放入培养皿中，（25±1）℃、相对湿度80%±10%饲养。 6、每个处理浓度3个重复，每个重复5头（2个浓度用虫）。 7、施药后每3d记录一次死虫数，连续调查5次。将死虫挑出保湿培养，记录僵虫数。白僵菌用PDA培养基扩繁培养7天左右用含0.1%吐温80的缓冲液将分生孢子粉湿润、洗脱，磁力搅拌器搅拌混匀用血球计数板在显微镜计数，用无菌水分别稀释成孢子浓度梯度为109、108、107、106、105个/mL的悬浮液备用采用浸渍法将黄粉虫虫体浸入孢子悬浮液中1秒，对照组浸渍无菌水处理浸渍后放于灭菌滤纸上爬行尽快吸干其身上多余的悬浮液，吸干后把试虫放入培养皿中，在（25±1）℃恒温箱饲养。每个处理浓度3个重复，每个重复5头（2个浓度用虫）；施药后每3d记录一次死虫数，连续调查5次。将死虫挑出保湿培养，记录僵虫数。