第九章 细胞功能分析研究整体方案.PDFVIP

细胞功能分析研究整体方案 细胞功能分析研究整体方案 一、 增殖实验 1、MTT/CCK8 （a)、MTT MTT 为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料。检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱 氢酶能使外源性 MTT 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜 （Formazan）并沉积在细胞中，而死 细胞无此功能。二甲基亚砜 （DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶标仪在 490nm 波长处测定其 光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT 结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值 （OD 值），来判断活细胞数量，OD 值越大，细胞活性越强 （如果是测药物毒性，则表示药物 毒性越小）。MTT 粉末和溶液保存时都需要避光，用铝箔纸包好就可以。 实验步骤： （1）、接种细胞 用含 10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔 1000-10000个细胞接种到 96 孔板，每孔体积 200ul。 （2）、培养细胞 同一般培养条件，培养 3-5 天 (可根据试验目的和要求决定培养时间)。 （3）、呈色 培养 3-5 天后，每孔加 MTT 溶液(5mg/ml用 PBS