原癌基因表达在哮喘气道重塑中的作用论文.docVIP

　　原癌基因表达在哮喘气道重塑中的作用论文 .freelyc，c-jun和c-sis的表达及其与气道重塑的关系. 结果 正常豚鼠气道及肺组织中c-fos和c-myc mRNA无或很少表达，哮喘发作后，豚鼠气道上皮及肺组织c-fos和c-myc mRNA表达明显增加;免疫组织化学染色显示Fos，Myc.freela;airodeling;guinea pigs Abstract:AIM To explore the role of proto-oncogenes in the process of airodeling in asthma.METHODS Guinea pigs a models challenged by ovoglobulin.Dot-blot，Northern-blot molecular hybridization and immunohistochemistry techniques yc，c-jun and c-sis.RESULTS c-fos and c-myc mRNA could not be detected or expressed at very loin after the challenge，the expressions of c-fos and c-myc mR-NA reached the peak and returned to normal4h after the challenge.Immunohistochemistry study shoulation.Immunohis-tochemically positive cells lay in the plasma of air，in cell nucleus of bronchial epithelium and in inflamma-tory cells.Pathologic studies shoooth muscle thick-ened around bronchia and lymphocyte infiltration under mu-cosa or around bronchia smooth muscle.CONCLUSION Proto-oncogenes expression plays an important role in the process of asthma airodeling. 0 引言 气道重塑（Airodeling）是支气管哮喘的重要病理特征之一，是哮喘长期反复发作的结果.许多因素如炎症介质、细胞因子及原癌基因都参与了这一过程.气道重塑是气道狭窄的重要原因，慢性气道炎症与气道重塑及气道高反应性的发生关系极为密切.原癌基因是生物体内的一类高度保守基因，控制细胞的生长和分化，同时参与炎症的发生.本研究通过检测豚鼠哮喘模型气道c-fos，c-jun及Fos，Jun，Myc，Sis的表达，以探讨它们与气道重塑的关系. 1 材料和方法 1.1 材料 盐酸胍、SDS购自美国Sigma公司，［α-32 P］dATP为北京福瑞公司产品，缺口平移标记盒为BRI公司产品，c-fos，c-myc质粒及Fos，Myc蛋白抗体由本校解剖教研室提供，Jun多克隆抗体购自北京中山生物技术公司，Sis抗体购自Santa Cruz公司. 1.2 动物及标本制作 正常成年雄性豚鼠（本校实验动物中心提供）40只，体质量300～400g，随机分为实验组（20只）和对照组（20只），实验组用100g L-1 的卵蛋白生理盐水ip致敏，2L冷生理盐水经右心室快速冲洗，再以300mL40g L-1 多聚甲醛缓慢灌注，固定40min，取气管、不同部位支气管置于同一固定液中固定12h，随之浸泡于4℃，200g L-1 蔗糖液内，于-20℃制备40μm厚片和15μm的邻片. 1.3 总RNA的提取 放血处死动物，立即剥离气道及肺组织，置-70℃冰箱冻存，异硫氰酸胍-饱和酚-氯仿法提取总RNA［1］ . 1.4 气道及肺组织c┐fos，c┐myc mRNA的测定 用含c-fos和c-myc的cDNA质粒，按Sambrook等［2］ 方法转染细菌，扩增制备质粒，相应内切酶酶切后用低融点琼脂糖法回收cDNA片段，［α32 P］-dATP缺口平移法分别标记fos和myc基因cDNA探针片段，然后进行RNA斑点杂交和Northern杂交. 1.5 Fos和Myc蛋白的免疫组化染色 ABC法按序PBS漂洗组织切片，以30mL L-1 羊血清1 200稀释一抗，二抗以1 200稀释，孵育1h，经PBS，Tris-HCl缓冲液充分漂洗，DAB显色，Mayer苏木精复染2