土贝母皂苷体外抗乙型肝炎病毒的药效研究论文.docVIP

　　土贝母皂苷体外抗乙型肝炎病毒的药效研究论文 周艳萌， 吴中明， 向晓波 【关键词】 土贝母皂苷；,,2．2．15细胞；,,乙型肝炎病毒；,,体外 摘要：目的观察土贝母皂苷体外抗乙型肝炎病毒(HBV)效果。方法以2．2．15细胞为靶细胞，给药后通过检测细胞表面及培养液中HBsAg，HBeAg和HBVDNA，观察土贝母皂苷抗HBV效果。结果土贝母皂苷各浓度组对HBsAg，HBeAg表达均有抑制作用，但以0.1 mg/ml作用48 h时最强.freelg/ml组显著（P 0.05）。结论土贝母皂苷在体外有抗乙型肝炎病毒(HBV)作用。 关键词：土贝母皂苷； 2．2．15细胞； 乙型肝炎病毒； 体外 Abstract：ObjectiveTo study the effect of antiHBV activity in vitro．MethodsThe antiHBV activity of Tubeimoside an hepatocellular carcinoma cells stably transfected oside could significantly reduce HBsAg、HBeAg level. After 48 hours of continuous exposure to Tubeimoside at the concentration of 0.1mg/ml in vitro culture, the inhibitions of HBsAg，HBeAg g/ml in vitro culture.ConclusionThe antiHBV effect of Tubeimoside is demonstrated in 2．2．15 cells． Key oside； 2．2．15 cells； HBV； In vitro 乙型肝炎是由嗜肝DNA病毒（Hepatitis B virus,HBV）引起的一种世界范围内的传染性疾病。目前全世界约有3亿多人为慢性HBV 感染，我国约占半数。受HBV慢性感染的人群罹患肝硬化和原发性肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）的相对危险性至少增加100倍，并最终导致死亡，给人们的健康造成极大的威胁和损害。因此，寻求高效低毒的抗HBV的天然药物已成为刻不容缓的问题［1，2］。土贝母含有多种化学成分，具有抗肿瘤、抗病毒、免疫抑制等多种药理作用［3］。陈英俊等［4］曾用土贝母加入九三三肝泰丸中治疗乙型肝炎208例，总有效率为93.4%，说明土贝母在治疗乙肝的复方中起到了一定的作用，但土贝母是否具有抗HBV的作用国内外尚未见报道。为了观察土贝母皂苷对乙型肝炎病毒是否有影响，我们用HBV基因转染的人肝癌细胞系（HepG2）的2.2.15细胞体外培养作工具，检测土贝母皂苷在体外对乙型肝炎病毒的作用。现将实验结果报告如下。 1 .材料与方法 1.1 材料2.2.15细胞系HBV（adl，转接种于6孔、96孔培养板及25 ml培养瓶中。培养4 d后换含不同浓度（10，5，1，0.1，0.01 mg/ml）的土贝母皂苷培养液，分别作用24，48，72 h。每24 h换液1次，共培养72 h，换出的上清及收集的细胞置20℃保存备测。以相同条件不含药物培养液和阳性对照药物(拉米夫定)培养液培养的细胞作为对照。空白孔不加细胞，只加培养液。 1.2.2 药物对细胞的毒性实验用MTT比色分析法［6］检测细胞吸光度值，与相应对照孔的吸光度值（存活细胞100）比较，按公式计算存活细胞的百分比，对细胞毒性进行动态观察。细胞存活率=（实验孔OD值/对照孔OD值）×100。 1.2.3 药物对2.2.15细胞HBsAg，HBeAg和HBcAg的影响细胞爬片：用间接免疫荧光法［7］进行染色，于荧光显微镜下观察，以胞膜或核膜呈黄绿色荧光者为阳性。流式细胞仪（FACS Calibur）检测：上机前细胞悬液用PBS液200 ml重悬，FITC受激发后发出黄绿色荧光，设定氩离子激发光源为488 nm，用Cell Quest软件采集细胞20000个再进行数据分析，以单参数直方图表示。 1.2.4 药物作用后细胞培养上清中HBsAg，HBeAg和HBVDNA的检测HBsAg、HBeAg的检测：用酶联免疫吸附试验（ELISA法）分别检测每孔HBsAg，HBeAg的P/N值，操作按试剂盒说明书进行，根据公式计算抑制率：某药对HBsAg或HBeAg的抑制率=［（对照组平均P/N药物处理组平均P/N）/对照 组平均P/N］×100［8］上清中HBVDNA的检测：实时荧光定量PCR法操作按试剂盒说明书进行，结果以Ct值表示。 1.3 统计学处理采用 SPSS10