大段同种异体骨移植复合BMP2和TGFβ2对兔桡骨中段骨缺损愈合的影响论文.docVIP

　　大段同种异体骨移植复合BMP2和TGFβ2对兔桡骨中段骨缺损愈合的影响论文 【摘要】 ［目的］探讨外源性TGFβ2和BMP2复合同种异体骨对骨缺损愈合的作用。［方法］用兔桡骨骨缺损模型，在骨缺损局部单独或联合应用TGFβ2和BMP2与同种异体骨复合，A组：同种异体骨与BMP2复合；B组（对照组）：自体骨；C组：同种异体骨与TGFβ2复合；D组：同种异体骨与TGFβ2、BMP2复合；通过不同时间X线片、生物力学、骨密度和骨痂钙含量的检测对骨缺损愈合情况进行评估。［结果］B组的骨痂钙含量、骨缺损愈合情况和愈合后的力学强度明显优于A、C、D组（P＜0.01），D组优于A、C组（P＜0.05），C组优于A组（P＜0.01）。［结论］TGFβ2和BMP2在骨缺损愈合过程中均发挥了重要的作用。在兔骨缺损周围局部应用外源性TGFβ2和BMP2与同种异体骨复合，可明显促进骨缺损愈合，使骨痂量增加，增强骨折愈合后的力学强度。并且在骨折愈合时间上接近自体骨移植骨折愈合的时间.freeling groorphogeic protein 2，BMP2）是骨形成与修复过程中重要的细胞因子〔2～4〕。单纯应用外源性BMP2和TGFβ2促进骨愈合的报道较多，但将外源性BMP2和TGFβ2复合用于骨折治疗的报道较少，而与同种异体骨复合则未见相关报道。同时外源性TGFβ2和BMP2对骨愈合相互作用的关系目前尚不很清楚，其与同种异体骨的兼容与否尚待进一步探讨。本实验是将同种异体骨移植与细胞生长因子复合起来，充分发挥BMP2和TGFβ2的治疗作用和同种异体骨支架的基床及引导作用，同时也为今后的研究工作提供参考。 1 材料与方法 1.1 同种异体骨的制备，参照文献〔5〕的方法。 1.2 BMP2和TGFβ2缓释微粒，均购于美国Cytolab公司。 1.3 动物 新西兰大白兔，雌雄各半，兔龄6～7个月，骨成熟，体重2.5～3 kg，由山西省农科院畜牧研究所试验兔场提供。 1.4 方法 1.4.1 实验分组 48只兔，随机分为同种异体骨+BMP2 、同种异体骨+TGFβ2、同种异体骨+BMP2+TGFβ2、自体骨（对照组）4组，每组12只，各组的性别和重量可比。 1.4.2 动物实验模型的建立 3%戊巴比妥钠耳缘静脉麻醉，无菌条件下做双前肢中段前外侧纵行切口约20 mm，暴露桡骨，在小骨膜剥离器保护下用口腔涡轮转于桡骨中段横行锯断，切除骨段（连同骨膜）10 mm，清洗创面，按表1植入各种材料，逐层缝合筋膜和皮肤，分笼饲养。术后3 d 40万U青霉素肌肉注射，1次/d。术后4、8、10、12周，ABCD组各随机选择3只动物，空气栓塞处死，游离桡骨标本备检。 表1 分组和处理（略） 1.4.3 BMP2和TGFβ2的用法 参照Miyamoto〔6〕的方法，在各个实验组内BMP2和TGFβ2的含量分别为100 μg和20 mg。手术当天将各个缓释微粒用负压系统置入异体骨，对照组在相应部位置入自体骨，作空白对照。 1.4.4 X线片观察 各组动物的桡骨分别在100 mA、50 KV、10 ms、靶物距75 cm的条件下摄X线正侧位片。对术后第4、8、10、12周，X线正侧位片显示的骨痂在图形分析系统上使用ql脱钙，回滴定法测定钙含量。 1.4.9 统计学处理 计量资料用x-±s表示，差异的显著性用方差分析，各实验组之间比较用LSD法检验，与对照组之间比较用Dunt检验。 2 结果 2.1 X线片观察结果 D组术后2周，缺损处截骨线模糊，有密度较低可见均匀的骨痂影，移植骨纹理模糊，出现不规则密度降低区。4周时，缺损内骨痂密度明显增高，充满整个缺损区，并有许多岛状骨化中心，移植骨部分吸收，移植骨与骨缺损端连接线模糊（图3）。8周时，缺损区内骨岛增大，并与骨痂相互融合呈片状密度增高影，部分新生骨皮质与宿主骨皮质连接（图4）。12周时，缺损区新骨形状已接近正常骨组织，中央部已基本形成骨髓腔，并与近、远端相通，外周骨皮质也与两端相连，基本达到正常厚度（图5）。A组在术后8周，仅在骨缺损端有少量新骨形成，并有部分软组织填充，12周时：断端边缘消失，骨膜反应密度更深，密度较骨质低（图6）。C组上述变化均晚于D组（图7～9）。B组在12周已完全愈合（图10）。 图34周D组：缺损内骨痂充满整个缺损区，移植骨部分吸收，移植骨与骨缺损端连接线模糊（略） 图48周D组：缺损区移植骨与缺损断端全部连接，密度较高，新生骨皮质与宿主骨皮质连接 （略） 图512周D组：缺损区已接近正常骨组织，中央部基本形成骨髓腔，并与近远端相通，外周骨皮质也与两端相连