大蒜素对小鼠膀胱癌的体内及体外抗肿瘤效果的实验研究论文.docVIP

　　大蒜素对小鼠膀胱癌的体内及体外抗肿瘤效果的实验研究论文 【摘要】 目的了解大蒜素对小鼠膀胱肿瘤的抗肿瘤效果与机制。方法通过MTT实验评定了大蒜素的直接细胞毒活性，动物实验显示大蒜素在体内有明显的抗肿瘤效果，并用LDH释放法测细胞毒活性。结果大蒜素对膀胱肿瘤有直接细胞毒作用。大剂量治疗组与对照组相比，肿瘤的生长速度明显受到抑制（P＜0.01），大蒜素治疗后产生了针对B16肿瘤细胞的淋巴细胞。结论大蒜素对膀胱肿瘤有明显的抗肿瘤作用。这种效果可能与直接细胞毒作用和免疫反应有关。大蒜素可能是一种有效的表浅膀胱癌腔内治疗药物。 【关键词】 大蒜素； 抗肿瘤； 膀胱肿瘤 The Experimental Research on the Antitumor Effect of Allicin on Murine Bladder Abstract：ObjectiveTo understand antitumor effect and mechanism of allicin on murine bladder.MethodsThe direct inhibition effects of allicin in vitro or effect of allicin in vivro ined by animal experiment. CTL activity of lymphocyte easured by the release of endogenous lactate dehydrogenase(LDH).Results Allicin had significant direct cytotoxicity to bladder cancer cells. In high dose group,it shoarked delay in the appearance and groors after s.c. injection pared phocyte responses to B16 tumor cells after treated arked antitumor effect on bladder tumor.This effect may be related to direct cytotoxicity and immune response.It may be an effective intravesical treatment agent for superficial bladder cancer. Key or effect； Bladder tumor 大蒜为百合科葱属两年生草本植物，有效成分为大蒜素，在我国民间药用已有三千多年的历史。现代研究提示大蒜对肿瘤有良好的防癌、抗癌作用。有报道显示大蒜提取液对膀胱肿瘤生长有明显抑制作用，但是一些实验动物死于治疗相关的毒性［1］。 B16肿瘤细胞是美国田纳西大学（Tennessee University）M.S.Solog/支；分子式C6H10S3；分子量178.33）。 2 方法 2.1 MTT实验在96孔板中建立细胞培养。在每孔中含5×103B16肿瘤细胞，每5孔为一组。为测定大蒜素在体外对肿瘤细胞生长率的影响，将不同剂量的大蒜素（2.5 ，0.5，0.1，0.02 mg·ml-1）与B16细胞共同培养48 h。加入MTT试剂培养最后4 h。酶标仪上波长560 nm测定OD值。 2.2 动物实验为测定大蒜素对膀胱肿瘤的治疗效果，将C3H/He小鼠分成3组，每一组含10只小鼠。第1组注射生理盐水1 ml（对照组），第2组注射12.5 mg大蒜素（低剂量组），第3组则注射25 mg大蒜素（高剂量组）。所种植的肿瘤细胞均用细胞铲从培养瓶中收集，用生理盐水洗2次。并将其悬浮于生理盐水中。浓度调整为1×106细胞/ml。将肿瘤细胞种植到C3H小鼠在后侧腹皮下，剂量为0.1 ml。次日将大蒜素注射到肿瘤附近的皮下，剂量分别为12.5 mg和25 mg的大蒜素。每周两次用测量器测定肿瘤的两径，观察肿瘤的生长情况［3］。 2.3 LDH释放法测细胞毒活性C3H/He小鼠皮下注射25 mg大蒜素一次进行免疫，注射生理盐水作为阴性对照。1周后收集脾细胞。96孔培养液板中将效应脾细胞与B16靶细胞按不同比例混合（混合比例从12.5∶1到100∶1）。每组3孔。在实验前，B16靶细胞与丝裂霉素C注射液（100 μg/ml）共同培养1 h。96孔培养板在37℃ CO2培养箱中培养24 h。按LDH细胞毒试剂盒提供方法与492 nm波长下检测。见图1。 细胞毒活性（%）=100%×实验组LDH-自然释放LDH最大释放LDH-自然释放LDH 2.4 统计