维生素E琥珀酸酯诱导黑色素瘤B16细胞分化的体外实验研究.pdfVIP

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文维生素E琥珀酸酯诱导黑色素瘤B16细胞分化的体外实验 研究 前言……………………………………………………………………8日IJ看……………………………………………………………………芍 材料与方法……………………………………………………………9 结果……………………………………………………………………14 附图……………………………………………………………………18 附表……………………………………………………………………30 讨论……………………………………………………………………32 参考文献………………………………………………………………38 综述黑色素瘤诱导分化研究进展………………………………………43 致谢…………………………………………………………………………52 个人简历……………………………………………………………………53 中文摘要 维生素E琥珀酸酯诱导黑色素瘤B16细胞分化的体外 实验研究 摘 要 E 目的：通过体外实验研究维生素E琥珀酸酯(Vitaminsuccinate，VES； a--tocopheryl 期和相关蛋白表达以及黑色素小体改变的影响并进一步探讨VES抑制黑 色素瘤细胞生长的作用机制，从而为黑色素瘤治疗提供新的方法及相应的 理论依据。 方法：体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞，采用四甲基偶氮唑蓝(MTT) 况及经瑞．吉染色后光学显微镜观察细胞形态变化并筛选出适合的药物浓 细胞作用48h后的细胞周期分布和凋亡率；应用透射电镜观察黑色素小体； NaOH裂解法测定黑色素含量变化；采用流式细胞术检测VES处理B16细 B16细胞的诱导分化作用及相应机制。 结果： 1VES抑制B16细胞增殖： VES处理细胞24～72h MTT法结果显示，51xg／ml、10pg／ml、201xg／ml 后，各处理组OD值均有不同程度下降，与对照组相比，有显著性差异 度的增大、作用时间的延长，VES各组OD值逐渐下降，抑制率升高，即 VES对B16细胞的增殖抑制作用呈明显的时间．剂量依赖效应。 2VES可诱导B16细胞周期阻滞和凋亡： VES作用于B16细胞48h 流式细胞仪检测结果显示，5、10、20}tg／ml 且该作用呈剂量依赖性。VES各剂量组凋亡率分别为0．42士o．14％、 中文摘要 O．72-4-0．1 无凋亡出现，证明在此范围内VES不能诱导鼠黑色素瘤B16细胞凋亡。 3VES对B16细胞形态的影响及电镜观察黑色素小体： 经瑞．吉染色后光镜下观察细胞形态发现：正常的黑色素瘤B16细胞呈 贴壁、多层生长，形态为圆形、椭圆形或多边形，生长不规则。而VES 作用于B16细胞后，细胞呈一定的极性生长，平行排列，不重叠，随着时 间延长，多数细胞体积变大，延长，细胞呈网状排列，具有树突状结构， 生长缓慢，细胞数明显变少，此形态变化于作用48h后较为明显。 电镜结果显示：在未经VES处理过的B16细胞中，胞膜完整，表面有 较多微绒毛，细胞核大，圆形，核浆比较大，常染色质丰富，异染色质较 少，胞质内可见游离核糖体，其他细胞器少，未见典型的黑色素小体；然 核内异染色质增多，核浆比变小，细胞器丰富，可见大量典型的黑色素小 体，未见凋亡形态的细胞，这与以上凋亡率的检测结果一致。 4黑色素含量的测定： 黑色素瘤细胞与正常黑色素细胞相比，黑色素合成能力低下。当被分 化诱导剂诱导分化时，黑色素生成能力明显增加，有效的分化诱导作用应 1 的VES作用于B6细胞48h后，黑色素含量与对照组比较，分