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实验八 重组转化子的快速鉴定重点讲义
实验八、重组转化子的快速鉴定
掌握快速鉴定重组转化子的方法
一、实验目的
二、实验原理
本鉴定方法是用碱性裂解液把转化子菌体裂解，然后直接用琼脂糖凝胶分离，通过比较白色和蓝色转化子质粒的迁移率，鉴定出重组转化子。
三、实验材料
菌落PCR检测增殖的菌落
该质粒载体用的是pUC的复制子，拷贝数能达到500-700个。
四、仪器设备
五、实验用具
微波炉 电泳仪 微型电泳槽
紫外透射检测仪 凝胶成像仪
移液器 吸管头若干 加样板
96孔培养板 牙签
六、试剂
七、实验步骤
1、用牙签从转化选择平板选取几十个白色和几个蓝色菌落，殖在LB平板上（添加Amp），37℃倒置过夜培养。
2、在96孔平板每孔加入20 ul 10mM EDTA。
3、用牙签挑取少量菌体（不能太少，也不能太多），悬浮于各孔中（其中1-2孔是蓝色菌落作为对照），将平板接触旋涡器几秒钟。
4 、加入20 ul裂解液，将平板接触旋涡器几秒钟，静置5分钟。
5 、将等量的1M KCl和载样缓冲液混合，各孔中加入6 ul，将平板接触旋涡器几秒钟。
6 、按蓝色菌落，白色菌落......最后蓝色菌落的顺序，各取20 ul点样。
7 、1.2%的琼脂糖凝胶电泳后观察。与蓝色菌落质粒迁移率比较，可判别白色菌落的重组质粒是否含有插入子。
挑取菌落勿太少，也不能太多。此外，裂解后菌液较粘，点样时吸管头勿垂直拉出以免带出点样孔内的菌液样品。
注意事项
1、你知道哪些重组子的鉴定方法？
2、重组子快速鉴定的原理是什么？请画出快速鉴定的电泳图。
思考题
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