实验五、梅毒重点讲义.pptVIP

实验五 梅毒螺旋体抗体检测 实验目的 1.掌握临床 常用检测梅毒 感染的方法及 操作程序 3.了解多 种方法联合 检测梅毒 感染的 临床意义 2.熟悉两种 方法的特点 梅毒螺旋体感染的常用检测方法 TRUST （检测非特异抗体） TPPA(检测特异性抗体） ELISA (检测特异性抗体） 现症梅毒的主要指标同时是判断治疗效果、复发的指标 特异性强，准确性高，但无法判断是否为现症梅毒 敏感性高，有一定的假阳性率 不同方法具有各自的特点 梅毒感染检测 （一） TRUST实验 实验原理 凝集法-检测非特异性抗体 + 抗心类脂抗原 反应卡滴加血清 产生凝集现象 抗原中加入了甲苯胺红染料，因甲苯胺红颗粒均匀，结果易于观察 实验试剂及器材 1.实验试剂 甲苯胺红溶液重悬的类脂抗原、阳性对照血清、阴性对照血清， 2.实验器材 滴管、反应纸卡 操作步骤 一、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 1.试剂及待检血清室温下平衡10min 2.在样本圈内加入待检血清及阴性、阳性血清，每圈50μl，尽量将血清铺匀涂满但不要超出卡圈 3.垂直向血清中心加入抗原1滴 4.旋转摇动卡片8分钟后立即观察结果 加血清 加抗原 旋转摇动 观察结果 结果分析 甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 阴性：呈现粉红色均匀分散的沉淀物 阳性：出现粉红色凝集块，根据凝集块大小可以分为4个阳性级别（1+～4+） 阴性 阳性 弱阳性 实验注意事项 稀释血清应准确及避免交叉污染 及时观察实验结果 抗体浓度过高可能发生前带现象而致假阴性,若TPPA或ELISA检测结果为阳性或弱阳性，需生理盐水稀释样本后重复实验。 临床意义 1.TRUST实验为梅毒螺旋体感染的血清学过筛试验，阴性不可排除感染，阳性需用特异性抗体的检测方法进行确认。 2.TRUST实验对现症梅毒的诊断具有较高价值，通过连续监测抗体滴度能够动态反映病程，此法在一期、二期梅毒的阳性率较高，与ELISA或TPPA检测结果综合分析能够更准确的诊断疾病。 （二） TPPA法-检测特异性抗体 明胶颗粒间接凝集实验（TPPA法) 实验试剂及器材 1.实验试剂 血清稀释液、致敏粒子、未致敏粒子以及其相应的溶解液，阳性对照血清 2.实验器材 专用滴管、反应板、微量加样器、微量加样器吸头、移液管 管号 1 2 3 4 5 6 7 稀释液(μl) 100 25 25 25 25 25 25 待检血清(μl) 25 25 25 25 25 25 25 未致敏颗粒(μl) - - 25 - - - - 致敏颗粒(μl) - - - 25 25 25 25 最终稀释倍数 - - 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1 2 3 4 5 未致敏颗粒 致敏颗粒 倍比稀释血清 TPPA法操作步骤 结果分析 TPPA间接凝集实验： 1）反应图像的判定 阴性（-）： 粒子集中于孔底呈纽扣状，呈现外周边缘均匀平滑的圆圈 弱阳性（+）：粒子形成小环状，呈现外周边缘均匀平滑的圆圈 阳性（+）：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围。 强阳性（++）：产生均匀的凝集，凝集粒子在底部整体上呈膜状延展。 2）最终判定基准：未致敏粒子的反应图像应为阴性。致敏粒子（最终稀释度1:80及以上）反应图像为阳性，最终应判定为阳性。反应图像为阳性的最终稀释倍数作为抗体效价。 1:40 1:80 未致敏颗粒阴性 致敏颗粒 阳性 阳性对照 最终判断： 阳性 待检血清 注意事项 1.试剂及检测样品应充分混匀，及时更换加样吸头避免交叉污染。 2.实验中不能随意移动反应板，否则容易造成假阳性。 3.保证足够的反应时间、及时观察结果。 4.阳性结果用另一种方法如ELISA法复查。 临床意义 梅毒螺旋体感染后2周左右患者血清中即可出现特异性IgM抗体，4周左右即可检测出特异性IgG抗体，TPPA法为检测 特异性IgG抗体的较好方法之一，其阳性可以提示曾经或现 在感染梅毒，与TRUST法的检测结果综合分析对梅毒的诊断、分期及治疗效果评价具有重要价值。 实验讨论 梅毒血清学的联合应用对梅毒诊断有何意义？ 实验讨论 TRUST法检测非特异性抗体，是现症梅毒患者实验室诊断的重要指标，但初期或晚期梅毒病人抗体浓度较低可出现假阴性，抗体浓度过高时出现前带现象也可出现假阴性，而某些疾病如自身免疫性疾病则可出现假阳性。 TRUST检测的非特异性抗体在感染1-2周即可出现，如滴度≥1∶4，又具有典型的临床表现，则现症梅毒的可能性较大。 需注意TRUST检测结果阳性需谨慎对