二乙酰一肟法测定血清尿素-培训课件.pptVIP

? 2004 McGraw-Hill Ryerson. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. 实验一：二乙酰一肟法测定血清尿素 一、实验目的 1.掌握血清尿素的测定原理和方法。 2. 了解尿素测定的参考范围及临床意义。 二、实验原理 尿素（urea）在强酸、加热的条件下，与二乙酰缩合生成红色的二嗪化合物（Fearon反应），其颜色深浅与尿素含量成正比。与同样处理的标准液在540nm处比色，求得尿素含量。由于二乙酰不稳定，一般由二乙酰一肟与强酸作用产生。其反应式如下： (无色) (粉红色) 1、主要器具 微量移液器 三、器材 试管与试管架 三用水浴箱 紫外可见分光光度计 四、试剂 1.酸性试剂　离子水约100ml、浓硫酸44ml、85%磷酸66ml、氨基硫脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O) 2g。 2.二乙酰一肟溶液　 3.尿素标准贮存液(100mmol/L)　 4.尿素标准应用液(5mmol/L)　 五、操作步骤 取试管7支，按下表操作 加入物（ml） 调零管 标准管 (S ×2) 质控管 (z ×2) 测定管(U1) 测定管(U2) 血清 —— —— —— 0.02 0.02 5mmol/L尿素标准应用液 质控品 —— —— 0.02 —— —— 0.02 —— —— —— —— 蒸馏水 0.02 —— —— —— —— 二乙酰一肟试剂 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 酸性试剂 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 混匀后，置沸水浴中加热12min，取出置冷水中冷却5min，波长540nm，空白管调零，分别读取各管吸光度 。 标准管 测定管 沸水浴中加热12min 冷水浴中冷却5min 标准管 测定管 六、计算 （A为吸光度值，取平均值） 参考范围：1.78~7.14mmol/L mmol/L 七、注意事项 1.血标本应及时处理，以防尿素酶水解尿素。最好血标 本加草酸钾或氟化钠抗凝以抑制尿素酶。 2.本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。 3.煮沸时间和煮沸时液体蒸发量影响结果。因此测定和 标准管的试管口径和煮沸时间应尽量一致。煮沸时间 延长吸光度反而降低。 4.显色反应产物对光不稳定，加入氨基硫脲和Cd2+能增加显色稳定性和显色强度，但仍有轻度褪色现象(＜5%/h)，故显色冷却后宜在20～30min比色完毕。 5.尿液中尿素也可用此法测定，但因浓度高，需先用去离子水作50倍以上稀释。 八、临床意义 1．血液尿素浓度增高 分生理性和病理性因素两方面。 生理因素： 高蛋白饮食引起血清尿素浓度和尿液排出量显著增高。血清尿素浓度男性比女性平均高0.3～0.5mmol/L，随年龄增加有增高倾向。成人日间生理变异平均为0.63mmol/L。 (2) 病理因素 1) 肾前性疾病：最重要的原因是失水，因血液浓缩使肾血流量减少，肾小球滤过率减低而致血液尿素浓度增加。 2) 肾性疾病：肾小球肾炎、肾病晚期、肾功能衰竭、慢性肾盂肾炎及中毒性肾炎等影响肾小球滤过的疾病，都可使血液尿素含量增高。 3) 肾后性疾病：所有使尿路阻塞的因素都可引起血液中尿素含量增高,如前列腺肿大、尿路结石、尿道狭窄、膀胱肿瘤致使尿道受压等。 2.血清尿素浓度降低 除婴儿、孕妇以及低蛋白高糖饮食者外,常见于肝功能衰竭患者。 九、方法学评价 1．本法试剂单一，方法简便，但试剂具毒性和腐蚀性。在标本数量多时加热开始难以达到100℃,各管间受热温度也可能不一致,因而本法重复性不佳.若改善加热条件,如采用在水浴锅底部加置高约5mm的网垫,在网垫上加热显色,可使CV由不加网垫时的6.46%降至2.99%。 2．线性上限仅达7.14mmol/L；回收率为96%～102.1%。 3．二乙酰一肟法的主要干扰来自血清中存在的含氮化合物。很多其它化合物在结构中会有尿素的残基，如瓜氨酸、四氧嘧啶和尿囊素，虽然也会产生一种带颜色的产物，但这些化合物在血清中浓度很低，故很少引起明显的干扰。另一些其它的化合物在血清中浓度高，但这些色素的最大吸收峰不同，因此不产生明显干扰。胆红素达171μmol/L、血红蛋白达10g/L均无影响。 ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. ? 2004 McGraw-Hill Ryerson. ?