Agilen1260高效液相色谱仪操作规程.doc

Agilent1260高效液相色谱仪操作规程1开机前准备1.1根据实验要求配制流动相，须经0.45μm滤膜过滤，之后再进行脱气处理，使用前必须用超声波振荡l0-15min，按无机相和有机相分开别装入溶剂瓶A（装有洗盐装置，最好固定盛放无机盐水相）、B中；对照品和样品溶液进样前要经0.45μm滤膜过滤。1.2若流动相中含有缓冲盐,则必须以每分钟2～3滴的速度虹吸10%的异丙醇水冲洗seal-wash，以防有盐结晶在泵头产生而损坏泵头。2 开机2.1打开电源，打开计算机，进入Windows?系统，从上到下依次打开各模块电源。2.2待各模块自检完成后，双击桌面上的“仪器1联机”图标，将自动进入化学工作站画面。2.3从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面,也可单击工作站画面左侧的“方法和运行控制”项，进入方法和运行控制窗口。2.4打开Purge阀（逆时针），右击“泵”图标出现参数设定菜单单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。2.5设“流量”逐步增大流速至5ml/min?，A通道设到100%，单击“确定”。2.6单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“泵控制“选项选中“开”单击“确定”则系统开始Purge，直到管路内由溶剂瓶A到泵入口无气泡为止；切换B通道（B通道设到100%）继续Purge直到所有通道管路内均无气泡为止。（查看柱前压力，若大于10Bar，则应更换排气阀内滤芯/过滤白头。）2.7将泵的流量设到0.5ml/min，若使用双泵则应设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）；再将流量设到0.8ml/min，2分钟后设定至方法所需流速，冲洗色谱柱20-30min。2.8单击泵下面的瓶图标，输入溶剂瓶A、B内流动相的实际体积（为保护泵和色谱柱，请按实际体积输入）和停泵的体积单击“确定”，如果各溶剂瓶溶剂体积小于停泵体积，泵将自动停止。2.9把缓冲液（用于柱子过渡的，与流动相等比例的乙腈/水、甲醇/水或10%的水溶液）换成流动相，排气后，逐步增加至所需流速，待柱压基本稳定后，打开检测器等，监视基线。3数据采集3.1采集方法编辑3.1.1编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”进入下一画面。3.1.2方法信息：在“方法注释”栏中加入（如方法的用途等），单击“确定”进入下一画面。3.1.3泵参数设定：在“流速”处输入方法所需流量（如1ml/min）；默认为A为100%，如需二元高压，在“溶剂B”处输入所需比例,则溶剂A=100-B?，也可“插入”一行“时间表”编辑二元梯度；在“压力限”处输入柱子的最大耐高压（建议设定200bar）以保护柱子,单击“确定”进入下一画面?。?3.1.4?VWD检测器参数设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm；在“峰宽(响应时间)”下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间（如0.1min?(2s)）；如有特殊要求，也可在“时间表”中可以“插入”一行输入随时间切换的波长（如1min?波长=300nm），点击“确定”。3.1.5在“运行时选项表”中选中“数据采集”选项，单击“确定”。3.1.6单击“方法”菜单选中“方法另存为”输入方法名，单击“确定”。3.1.7从“视图”菜单中选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后单击“改变”钮,将所要查看的信号移到右边框中,单击“确定”。3.1.8进样器参数设定：在进样模式中输入“进样量”xxμl，默认为20μl。“标准进针”只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“针清洗后进样”可以输入进样体积和洗瓶位置为xx，此方式针从样品瓶抽完样品后会在洗瓶中洗针。进样器进样程序参数设定：选中使用进样程序，在“函数”中添加相应函 数即可按程序进样。3.1.9TCC检测器参数设定：在“温度”左侧下面的方框内输入所需温度，并选中它，右侧选中“与左侧相同”——使柱温箱的温度左右一致。3.2运行方法3.2.1单针进样3.2.1.1选择“单针进样”图标。3.2.1.2从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入“操作者名称”，数据存储目录路径中的子目录，子目录即为数据图谱存储的文件夹，输入后，鼠标点击其他地方，会自动弹出“E：\——不存在，要创建它吗？”单击“确定”。“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。（区别:“手动”--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉；“前缀/计数器”在“前缀”框中输入前缀，在“计数器” 框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名如20120505000001、20120505000002等等。）“样品位置”填写进样瓶的位置。3.2.1.3点击画面中的“开始”运行方法，中间停止采样点“结束”。3.2.2序列进样3.2.2.1“序列”下