埃希菌属的鉴定.docxVIP

埃希菌属的鉴定1、标本要求： 1.1 尽量用药前采集标本。1.2 痰液：病人清晨咳痰于无菌、防漏小塑料盒内，切勿唾液送检。1.3 尿液：病人留取12h尿液，送检。1.4 粪便：病人留取粪便510g，送检。1.5 脑脊液及其它无菌体液：用无菌瓶直接送检。血标本不要冷冻。1.6 不可接受的标本：干的拭子、蜡盒、未消毒容器、留取24h后的尿或痰、破裂的瓶子、标本泄漏、标本无标签。2、仪器36℃孵箱、普通光学显微镜3、试剂羊血平皿、巧克力平皿、麦康凯平皿、葡萄糖蛋白胨水、葡萄糖酸盐培养管、苯丙氨酸脱氨培养管、氨基酸脱羧培养管、尿素培养管、糖醇发酵管、湖南长沙天地人肠杆菌鉴定板。4、试验方法及原理：4.1 甲基红试验方法：将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，孵育过夜，加甲基红试剂1～2滴，观察结果。 结果：红色为阳性，桔黄色为阴性。4.2 尿酶试验方法：将待检菌穿刺接种于尿素培养管中，孵育过夜，观察结果。结果：培养管变红为尿素阳性，不变色为阴性。4.3 氨基酸脱羧试验方法：取待检菌接种于氨基酸脱羧培养管和对照管中，封石腊油，35℃培养过夜，观察结果。结果：培养管变紫色为阳性，黄色为阴性。对照管应保持黄色。注意点：（1）．培养管的pH值很重要。（2）．加封石腊油造成厌氧环境。因为在厌氧情况下氨基酸脱羧生成的胺才稳定。（3）．对照管如不呈黄色，则氨基酸脱羧酶试验不能作出判定。4.4葡萄糖酸盐试验方法：大量接种待检菌于葡萄糖酸盐培养管中，35℃孵育过夜或至48h，加班氏试剂，水浴中煮沸 lOmin。4.5 糖、醇发酵试验方法：接种待检菌于糖醇发酵管，35℃孵育过夜，观察。结果：培养管变红色为阳性，不变色或黄色为阴性。4.6 苯丙氨酸脱氨试验方法：将待检菌接种于苯丙氨酸脱氨培养管，35℃孵育过夜，加三氯化铁试剂，观察结果。结果：培养管变绿色为阳性，不变色为阴性。5、常规鉴定过程：5.1 染色与形态：革兰阴性直短杆菌，其菌体大小为（1.1－1.5）μm×（2.0－6.0）μm。多数有周鞭毛，能运动，，某些菌株尤其是引起肠外感染的菌株有荚膜（微荚膜）和周身菌毛。5.2 培养特性：兼性厌氧，营养要求不高，普通营养琼脂上生长良好，形成较大的圆形、光滑、湿润、灰白色的菌落，少数在血平板上可产生溶血环。在肠道选择培养基上可发酵乳糖，形成有色菌落。5.3 生化反应及鉴定要点：埃希菌属从临床标本中常分离的是大肠埃希菌，靛基质“+”，甲基红“+”，枸橼酸“-”，但某些菌株动力“-”，迟缓发酵或禾发酵乳糖。不产气的菌株与志贺菌属的区别见表1。出血性腹泻的大肠埃希菌，其中最常见的为Ο157：H7型，研究也较清楚。该菌种对山梨醇不分解(35℃24～48h)。最后用血清学诊断方法确定。表1 埃希菌种与其他菌种的鉴别试 验蟑螂埃希菌大肠埃希菌大肠埃希菌(代谢不活泼菌株)费格森埃希菌赫尔埃希菌创伤埃希菌宋内志贺菌其他志贺菌聚团肠杆菌迟缓爱德华菌不脱羧莱克勒菌靛基质-+[+]++--d[-]++V-P--------d--枸橼酸盐d--[-]----d--硫化氢---------+-尿素水解--------[-]-[-]赖氨酸++d+-[+]---+-鸟氨酸+d[-]++-+--+-动 力-+-+++--[+]+[+]氰化钾生长----+[-]--d-+丙二酸盐+--d-[+]--d-+葡萄糖产气++-+++--[-]++侧金盏花醇---+------+纤维二糖---+++--d-+乳 糖-+[-]-d[-]--d-+甘露醇-++++++++-+蜜二糖-[+]d--+[-]dd-+鼠李糖+[+]d+++[+]-[+]-+山梨醇-+[+]----dd--木 糖++d+++--+-+粘酸盐d+d-+[+]--d-d醋酸盐-+d+[+]d--d-[-]黄色色素----+d--[+]-[-y]注：-，0～10％阳性；[-]，11％～25％阳性；d，26％～75％阳性；[+]，76％～89％阳性； +，90％～100％阳性；[-Y]，11％～25％产黄色素。6、药敏试验：6.1 挑取单个麦康凯平板上单个菌落(革兰染色阴性杆菌,氧化酶阴性,粉红色),配成0.5麦氏单位药敏液,滴加于天地人肠杆菌药敏板中进行药敏试验,结果通过天地人药敏软件判读。具体可参看天地人药敏板半自动操作规程。6.2 超广谱β－内酰胺酶（ESBLs）：大肠埃希菌属细菌容易产生，该酶由质粒介导，从广谱β－内酰胺酶突变而来。产ESBLs的菌株在体外抗生素药敏试验中，对第三代头孢菌素（如头孢泊肟，头孢他啶、头孢曲松、头孢噻肟或氨曲南）的抑菌圈减小，但不一定在耐药范围（可表示为R、I、S），而临床对β－内酰胺类（青霉素、头孢菌素或氨曲南）均耐药，对碳青霉烯和头霉烯敏感。临床实验室应具备检测ESBLs