植物叶中DNA的提取.ppt

植物叶片DNA的提取 DNA extraction;实验原理;实验材料和试剂;实验仪器;离心机;各种型号的微量移液枪;研钵;实验步骤： 水稻幼苗或叶片0.1-0.2g, 剪碎, 置研钵中，加入1mL提取缓冲液， 研磨成浆； 2. 吸入1.5mL EP管中，剧烈摇动混匀； 3. 60℃水浴保温30-60min，不时颠倒混匀； 4. 室温下10000rpm离心5min； 5. 小心吸上清于新的离心管中，加入等体积氯仿，剧烈震动； 6. 室温下10000rpm离心5min； 7. 小心将上清吸入新的离心管中； 8. 加入1倍体积异丙醇，室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 8000rpm离心5min ，弃掉上清； 75％酒精洗一次，晾干沉淀； 10. 加入5μL RNaseA（10μg/μL）, 37℃ 10min, 除去RNA。 11. 加50-100μl水融解，-20贮存。 ;1. 植物叶子0.1- 0.2g, 剪碎置预冷研钵中 ;2. 吸入1.5mLeppendorf 管中，摇动混匀 ;3. 60℃水浴保温30-60min;4. 10000rpm离心5min;5. 吸上清于新的离心管中，???入等体积氯仿，颠倒混匀;6. 再次10000rpm离心5min； 将上清小心吸入新的离心管中； ;7. 加入1倍体积异丙醇，-20 ℃放置10min，出现絮状DNA沉淀； 随后8000rpm离心5min ，弃掉上清；75％酒精洗沉淀一次晾干沉淀；加5μL RNaseA (10μg/μL), 37℃ 10min, 除去RNA； 加50-100μL的TE Buffer ，取1-5μL电泳检测；其余-20 ℃ 贮存备用。;DNA样品在0.7% Agarose胶上电泳（例图） ;实验注意事项;思考题: 为什么构建DNA文库时, 一定要用大分 子DNA？ 2. 如何检测和保证DNA的质量？