不同炮制方法对附子中3种双酯型生物碱含量的影响论文.docVIP

　　不同炮制方法对附子中3种双酯型生物碱含量的影响论文 【摘要】 目的研究不同炮制方法对附子中3种双酯型生物碱含量的影响。方法分别采用江西建昌帮煨制法、樟树帮法与《中国药典》方法制备附子炮制品，以高效液相色谱(HPLC)方法测定其中新乌头碱、乌头碱与次乌头碱含量。结果不同的附子炮制品中新乌头碱、乌头碱与次乌头碱的平均质量分数(ωB)分别为：建昌帮煨制法：(2.11±0.28)μg·g-1，(6.70±0.19)μg·g-1，(11.24±0.93)μg·g-1;樟树帮法：(2.35±0.37)μg·g-1，(3.21±0.89) μg·g-1，(8.05±0.90)μg·g-1;中国药典法：(1.41±0.16)μg·g-1，0，(1.64±0.21)μg·g-1。结论建昌帮煨制附子中3种双酯型生物碱含量的总量高于其他两种方法.freel carmichaeli Debx.的子根加工品，药性辛、热，有大毒，具有回阳救逆、补火助阳、散寒止痛的功效1，临床主要以炮制品应用为主。由于附子炮制方法甚多，工艺也不统一，由此造成附子饮片质量良莠不齐，严重影响了附子临床应用的安全与有效。本文采用江西建昌帮煨制法、樟树帮法与《中国药典》方法等3种方法炮制附子，并研究比较了不同附子炮制品中3种双酯型生物碱的含量差异。 1 仪器与材料 1.1 仪器岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪(岛津公司);N2000色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所);Tu-1901型紫外可见分光光度计(北京普析);METTLER- TOLEDD AB265-S型电子分析天平(瑞士)。 1.2 材料附子药材购自江油中坝附子科技发展有限公司，经本校李秀英副教授鉴定为毛莨科植物乌头 Aconitum carmichaeli 的子根加工品;辅料：甘草、皂角由本校标本陈列室提供，生姜、黑豆、薯粉购自食品综合超市;对照品：新乌头碱(110799-200404)、乌头碱(110720-200410)、次乌头碱(110798-200404)，购自中国药品生物制品检定所;试剂除HPLC用乙腈为色谱纯外，其他均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 附子炮制品的制备 2.1.1 建昌帮煨附子取盐附子，洗净，用清水浸漂至盐分去尽后，取出，晾干。然后均匀平铺于细糠灰中，上面覆盖一层净生姜片，生姜片上平覆盖2张草纸，纸上在铺一层净细糠灰，灰上平铺少量稻草、干糠壳。然后再于四角点火引燃，待糠烬灰冷，取出附子，再蒸8～10 h，取出，日摊夜闷至半干，切纵薄片，晾晒干。 2.1.2 药典法黑顺片取泥附子洗净，浸入食用胆巴水中数日，连同浸液煮至透心，捞出，水漂，纵切成厚约0.5 cm的片，再用水浸漂，用调色液使附子染成浓茶色，取出，蒸到出现油面、光泽后，烘至半干，再晒干或继续烘干。 2.1.3 樟树帮黑顺附取盐附子，削去粗皮，用米泔水浸渍后再用清水浸漂，然后加水、甘草、黑豆、皂角同放入锅内，用文火煮至中央无白心为度。捞起拣尽辅料，晒至七成干，放入缸内闷润2 d，切成4分厚直片，加薯粉及少许清水，拌匀，置木甑内蒸4h，放凉，使附片表面“结面”，用文火烘干。 2.2 溶液的制备 2.2.1 混合对照品溶液的制备精密称取新乌头碱、乌头碱、次乌头碱对照品适量，加甲醇制成每毫升分别含16，25.6，32.1 μg的混合对照品溶液，备用。 2.2.2 供试品溶液的制备称取生附子粗粉约0.1 g，盐附子粗粉约2 g及附子炮制品粗粉约3 g，精密称量，分别置150 ml具塞锥形瓶中，加入浓氨水3 ml润湿0.5 h，加入乙醚100 ml密塞，放置过夜，次日超声15 min，过滤，再以30 ml乙醚分次洗涤滤渣过滤，合并滤液和洗液，40℃水浴挥干，甲醇溶解残渣并定容至2 ml，摇匀，临用前用0.45 μm微孔滤膜滤过，备用。 2.3 色谱条件色谱柱为Venusil XBP-C18柱(5 μm，4.6 mm×250 mm);流动相为乙腈-20 mmol·L-1NaH2PO4(磷酸调pH4.0)(50:50)(内含10 mmol·L-1十二烷基硫酸钠);流速1.0 ml/min;检测波长235 nm;柱温35℃。精密吸取“2.2”项下混合对照品溶液10μl，供试品溶液各20μl进行色谱分析，记录色谱图。结果见图1。a新乌头碱、乌头碱、次乌头碱对照品 b生附子c盐附子 d建昌帮煨附子 e樟树帮黑顺附 f中国药典黑顺片图1 高效液相色谱图 2.4 线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液1，2，4，6，8，10 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取20 μl，依次注入液相色谱仪，测定。以进样量X(μg)对峰面积A进行线性回归，回归方程分别为：新乌头碱：A= 683