参附注射液对大鼠肢体缺血再灌注后髓过氧化物酶、丙二醛和能量代谢酶的影响论文.docVIP

　　参附注射液对大鼠肢体缺血再灌注后髓过氧化物酶、丙二醛和能量代谢酶的影响论文 .freelL/kg),.freelin后夹闭股动静脉。再灌注前15 min,再次自尾静脉注入同样浓度参附注射液,检测骨骼肌组织MPO、MDA、湿重/干重值(PO、MDA、ethods Rat posterior limb ischemia/reperfusion model ade. Thirty SD rats ly divided into three groups (n＝10)：sham group (group A), ischemia/reperfusion group (group B) and shenfu injection treatment group(group C). In group A, the rats received sham operation only. In group B, the animals recieved posterior limb ischemia 4 hours and reperfusion 4 hours. In group C, shenfu injection 2.0 mL/kg in before ischemia and 15 min before reperfusion. The level of malondialdehyde (MDA), myeloperoxidase (MPO), e oxidase (CCO) and Ca2+-ATPase in the skeletal muscle easured at the end of the experiment. Results Shenfu injection can reduce the heightened level of MDA, MPO, PO)、丙二醛(MDA)试剂盒,由南京建成生物工程研究所提供。参附注射液系医用注射液,雅安三九药业有限公司产品,批准文号：国药准字批号041106。 2 实验方法 2.1 造模 2%戊巴比妥钠(首次40 mg/kg体重,维持量20 mg/kg体重)腹腔注射麻醉后,参照Crinnion1法建立大鼠后肢骨骼肌缺血再灌注损伤模型。 2.2 分组 实验前12 h禁食,自由饮水,随机分为3组。A组(对照组)10只,仅麻醉及颈外静脉插管术；B组(缺血再灌注治疗组)10只,缺血4 h后放开止血带,再灌注4 h；C组(参附注射液治疗组)10只,再灌注前15 min自颈外静脉给参附注射液5 mg/kg；而B组仅给予等量的生理盐水作为对照。再灌注4 h即颈动脉放血处死动物,于后肢腓肠肌取材。 2.3 观测指标及方法 MDA、MPO检测严格按试剂盒要求进行。湿重/干重(PO、MDA、PO活性及反映微血管通透性的DA在B组中明显高于A组(P 0.01)。 3.2 对细胞色素氧化酶的影响 正常骨骼肌细胞此酶呈中等阳性至强阳性(＋＋～＋＋＋), B组此酶活性降至阳性(＋),C组此酶为中等阳性(＋＋),明显强于缺血再灌注组。 3.3 对钙激活ATP酶活性的影响 正常骨骼肌细胞此酶活性为阳性至中等阳性(＋～＋＋)。 B组此酶活性为弱阳性(±),C组此酶活性为阳性(＋),强于B组。 4 讨论 肢体结构中对缺血最敏感的是骨骼肌,缺血4～6 h就可发生不可逆性损伤。Beyersderf等3研究证明,骨骼肌在较长的缺血时间内仍能保持完整结构,但在恢复正常血流即再灌注时,能量耗竭的肌细胞则发生了损伤性改变。本实验观察到,骨骼肌缺血再灌注后组织水肿明显,肌肉组织中性粒细胞浸润增加。再灌注前用参附注射液,减轻了再灌注过程中组织水肿,并缓解了中性粒细胞浸润等缺血再灌注时的损伤性表现。 骨骼肌缺血再灌注期间,黄嘌呤氧化和白细胞的呼吸爆发产生大量的自由基,直接造成组织的脂质过氧化、蛋白质变性及酶活性降低,是骨骼肌再灌注损伤的重要病理因素之一。MDA是氧自由基致脂质过氧化的中间代谢产物,可间接反映体内氧自由基产生量的变化。本研究中缺血再灌注损伤组在再灌注后组织MDA增加,参附注射液组MDA和缺血再灌注组相比明显减少,表明参附注射液具有清除氧自由基的作用,使骨骼肌细胞免受氧自由基的损伤。细胞内低浓度钙是维持细胞正常生理功能的保证。骨骼肌缺血再灌注后细胞内钙离子大量蓄积,出现“钙超载”现象,这种钙超负荷可导致细胞功能降低,加重缺血后肌肉崩解。骨骼肌缺血再灌注时ATP生成减少,使细胞Na+-Ca2+交换增加,再灌注后由于恢复了能量供应和ATP值,从而促进Na+-Ca2+交换,使细胞外钙大量内流,造成细胞内钙超载。参附注射液能对抗氧自由基对基质网Ca2+-ATP