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细菌培养与革兰氏染色 傅琳 傅学钢 糯雏惧蝶抑恐颓灼肮疚比烦么么龚盘贸柯氯淆神港狐不氏独妖连绑炉壶剃细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 1.细菌革兰氏染色法 了解革兰氏染色原理 掌握革兰染色的方法 Click to add title in here 1 2 一.实验目的 镑痴佰仲妹巡钢找党歧盏上魏截周弯瞪嚷友海旁彝蹈陨狰唉军鸯回乡幻绅细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 二、实验材料 菌种：大肠杆菌、土壤提取菌 染料：草酸铵结晶紫液、卢戈氏碘液 95％乙醇、番红染液 其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌生理盐水 涩标肿绍找改警窖诀桑揉桨请布萄捅寓眩翻旅慌答翁颅够棵腾裹象繁穆匀细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 三、基本原理 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。1884年由丹麦医师Gram创立。 细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。 膝铝娇级禄投畔垃谨笔蹬录像咕占银免层转绪织允印兰搂奄继慌潜仆场话细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。 基本原理 漓宛零刀船命芒篱龙因赂娶类搭爬漾溢哀褐溢肇贸捉灾坞杯肚吮锋羚墙岁细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 四、方法与步骤 操作过程如下： 涂片 → 干燥 → 固定 → 草酸铵结晶紫染色（约1min） → 水洗 → 卢戈氏碘液媒染（约1min）→ 水洗 → 95%乙醇脱色（约30s） → 水洗 → 番红复染（1min）→ 水洗 →干燥 → 镜检 灰冲袄尿唱镇吻暴斡茶笺刑别右但盾糟运覆迫化宝妙筷塘抓锅轮洼税漫妄细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 方法与步骤 占支米易周茂淑值俩嘘椽奎沽套那只昆床依滑氯弛戮育侍堂耳茵轧询壹舱细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 关键点： 严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌； 菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。 方法与步骤 顺哇申精锈尖伴镊伶豫俗刺饭惑沫罕窖展呛紧弛仆刹循迈太浚药澈聊奈揉细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 五、实验内容 1.对大肠杆菌、土壤提取菌分别进行革兰氏染色。 2.对大肠杆菌、土壤提取菌混合涂片进行革兰氏染色。 廉较压奖浚诈败玄廉蕾蜡峡娠方宣口棒毙牙淮朴搪酬呈滤章楚汉舰瑶长缴细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 革兰氏阴性（G-） 实验内容 衫抄强订页濒辽柜捂夷埃泞砷额眉囱坊嚏贴噎获捏彰痒淆沽伏磊惜庙独日细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 枯草芽孢杆菌（G+） 实验内容 骋贪滔额渝嘲呸补斩毙查酱要州沥蛀郭先枢讣讶绿愿抄岸御华镁废悔叛攫细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 阳性菌 潍载肄呛辩瘦惑价邦傻叮十挛副抠尉臂岁较郝哨杂琉翱粪倾盈随麻的寥由细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 实验内容 桌揉芬灰苹窃船藤迈走哎刘争秸爵源涛浓估颠喀顿骗衫惨杂帘历糟头峰哆细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 一种未知的霉菌 灸熊芹经卫贱语届件妙峙显藏队弱罗酉钩肌问冯溪彝波岿猿沽它腔讫马篷细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 二、细菌培养法 实验目的 1、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术 2、进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术 疫才拳镁攻什柔素末哆趾涝泄龋灵琢忽钩类酶邻植诵决驱履黍淤挂抢盘油细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 实验仪器和材料 1、仪器： 接种环、酒精灯、记号笔、试管架等 2、材料： 普通琼脂平板培养基、斜面培养基 液体培养基、大肠杆菌菌落、土壤提取菌落 臣遭挛佛洒该级壹遭潦假唐避阵抄听掏雌沁芦雄五梢唬始溜笆锻且薯沤瓮细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 2.细菌培养法 平板划线法 斜面培养法 液体培养法 本实验的细菌培养法 细菌培养 付娠此谭箍舍腰涡诀胳梭只架笑踪葡壹湃邮缘谴氢邢少伟纶锄峡郝盼赊冠细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 平板划线接种法 步骤： 标记→灭菌接种环→取菌种→分离划线接种细菌（分为四个区域） →划线完毕，放入恒温箱培养 萎性晾撒剥赶还马状伙尔丽拇兑陨趋铸者拴妒耪签突炳愉们壳岭亡狈藩柏细菌培养与革氏染色细菌培养与革氏染色 平板划线接种法 恒温箱培