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实验一 微生物培养基的配制和灭菌及空气中微生物的认识 一.实验目的： 1、明确培养基配制的基本原理； 2、掌握培养基配制的一般方法和步骤； 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理和操作方法； 4、认识微生物存在的普遍性。 二.实验原理： 培养基是按照微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的各种营养物质，用人工方法配制而成的一种基质。它包括碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水六类营养要素。由于不同微生物细胞组成不同，因而所需营养基质不同，为了分离、培养和鉴定不同的微生物，必须根据其需要，配制合适的培养基。 培养基的种类繁多，根据培养基的成分、物理性状不同，可分为天然培养基、合成培养基、半合成培养基、固体培养基、半固体培养基和液体培养基。 灭菌是指应用物理或化学的方法，杀灭物体表面和内部一切微生物营养体、芽孢和孢子。灭菌方法很多，可分为加热、过滤、照射和化学药品法等。 常用加热灭菌法： 1、干热灭菌： 用火焰烧灼或电热干燥箱内高温热空气灭菌 2、湿热灭菌 ⑴高压蒸汽灭菌法 ⑵间歇灭菌法 ⑶煮沸消毒法 三、实验材料 每组同学需要准备以下材料（14人/组）： 小试管：21支（15*150mm） 培养皿：60套（ф9cm） 移液管：15支(1000ml）、1支(10l) 三角玻璃棒：2支 瓷缸：1个（1000ml） 三角瓶：3个（500ml)、1个（250ml)、2个（100ml) 量筒：1个（100ml） 玻棒：1支 分液漏斗：1套 药匙：2把 标签贴纸：1张 记号笔：1支 四、实验步骤 培养基的制备过程称量---溶解----调节pH值----过滤----分装及包扎----灭菌----灭菌后试管摆放斜面 1.称量按照培养基配方，准确称量各成份放于瓷缸中。 配方： 牛肉膏 5 g 蛋白胨 10 g NaCl 5 g 蒸馏水 1000 ml 琼脂 20 g (另称于三角瓶中) 2N NaOH配制： 1.量取80ml去离子水置于100-200ml塑料杯中。 2.称取8g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。 3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至于100ml。 4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。 2.5N HCL配制： 1.在78.4ml的去离子水中加入21.6ml的浓盐酸，均匀混合。 2.室温保存。 2.溶解 向上述瓷缸中加入所需要的水量，搅拌使其溶解。如是配制固体培养基，在琼脂的熔化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。待完全熔化后，补足所失水分。 3.调节pH值 用玻璃棒沾少许液体，测量PH值。用氢氧化钠和盐酸调节PH。 4.过滤用滤纸或多层纱布过滤，一般无特殊要求可省去。 5.分装及包扎 根据不同的需要，可将制好的培养基分装入试管内（用分装漏斗）或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。最后用牛皮纸将棉塞部分包好。 6.无菌水的制备 无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。250mL三角烧瓶（装有玻璃珠），分别装自来水90mL和100mL，塞上棉塞，包扎、灭菌备用。 7.灭菌：高压蒸汽灭菌，1210C 操作过程 加水à装锅à盖盖à加热à当压力升为0.5kg/cm2时排放冷空气à正式升压à保压（1.1kg/cm2，121℃，保持20-30min）à停止加热à自然降压至零à排放余汽à开盖à取出灭菌物品à趁热摆斜面à检验灭菌效果。 8. 灭菌后试管摆放斜面 当培养基冷却至50℃左右时，将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上。搁置的长度要合适，使培养基形成的斜面的长度不超过试管总长的一半。 注 意 事 项 1、称取药品时严防药品混杂，一把牛角匙称一种药品； 2、蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速； 2、配制固体培养基时，先将其他药品加热溶解到快沸时，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼脂完全熔化，此过程要不断搅拌，以免琼脂糊底，并控制火力，防止沸腾外溢； 4、分装量根据试管大小和实际需要而定，固体培养基装量约为管高的1/5，液体培养基的装量约为管高的1/4，三角瓶的装量不超过瓶体的1/2 ； 5、分装过程中注意不要将培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污棉塞而引起污染。 9.倒平板的方法 将培养基加热融化，待冷却至55－60 0C时，倒平