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Reverse Micellar Extraction反胶束萃取及其应用 理研1307 景楠 2013201075 产生背景 传统萃取方法（如溶剂萃取）难应用于蛋白质的分离，原因： 1.大多数蛋白质都不溶于有机溶剂，与有机溶剂接触，也会引起蛋白质的变性 2.萃取剂问题，蛋白质分子表面带有许多电荷，普通的离子缔合型萃取剂很难起作用 反胶束萃取 反胶束 正常胶束：表面活性剂溶于水中, 当浓度超过临界胶束浓度(CMC)时, 就会聚集在一起而形成正常胶束，亲水基向外、疏水基向内。 反胶束: 当油相中表面活性剂的浓度超过临界胶束浓度(CMC)时, 其分子在非极性溶剂中自发形成的亲水基向内、疏水基向外的具有极性内核的多分子聚集体。 反胶束的制备 注入法：将含蛋白质的水溶液直接注入到含表面活性剂的非极性有机溶剂中，然后进行搅拌直至形成透明溶液为止（过程较快、可控制平均直径和含水量）。 相转移法：将含蛋白质的水相和含表面活性剂的有机相接触，在缓慢搅拌下，一部分蛋白质转移至有机相中。（过程较慢，处于稳定的热力学平衡状态和获得较高的蛋白质浓度）。 溶解法：对非水溶性的蛋白质可用此法。将含有反胶束的有机溶液与蛋白质固体粉末一起搅拌时蛋白质进入反胶束中（需较长的时间）。 反胶束萃取体系 单一反胶束体系： 阴离子型：AOT(丁二酸- 2 - 乙基已基酯磺酸钠)/ 异 辛烷 阳离子型：十六烷基三甲基溴化铵(CTAB) 、二辛基 二甲基氯化铵等季铵盐 非离子型：能使反胶团变大, 从而可萃取相对分子质 量更大的蛋白质 混合反胶束体系：两种或两种以上表面活性剂构成的体系，蛋白质的分离效率更高 反胶团溶解蛋白质模型 1.水壳模型（普遍接受） 2.蛋白质疏水部分直接与有机相接触 3.蛋白质吸附在反胶团内壁 4.蛋白质的疏水区与几个反胶团的表面活性剂疏水尾发生相互作用，被几个小反胶团所“溶解” 反胶团溶解蛋白质机理 反胶团的极性内核在溶解了水后,在内核中形成“微水池”, 可以进一步溶解蛋白质等生物活性物质。 屏蔽作用使蛋白质不与有机溶剂直接接触, 而水池的微环境又保护了其活性, 从而达到了溶解和分离目的 反胶团溶解蛋白质过程 蛋白质进入反胶束溶液是一种协同过程 改变水相条件（pH、离子种类和强度）使蛋白质由有机相返回水相，实现反萃取过程. 蛋白质 表面活性剂 静电作用 变形 含有蛋白质的反胶束 扩散进入有机相 蛋白质萃取 反胶束萃取的影响因素 与反胶束团有关的因素 与目标蛋白质有关的因素 表面活性剂的种类 蛋白质的等电点 表面活性剂的浓度 蛋白质的大小 表面溶剂的种类 蛋白质的浓度 助表面活性剂及其浓度 蛋白质表面的电荷分布 与水相有关的因素 与环境有关的因素 pH值 系统温度 离子种类 系统压力 离子强度 反胶束萃取的优点 成本低，溶剂可反复使用 萃取率和反萃取率高 解决蛋白质变性、降解的问题. 从完整细胞中提取蛋白质和酶 具有工业开发前景的蛋白质分离技术 反胶束萃取的应用实例 混合反胶团萃取α-淀粉酶 以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和脱水山梨醇单硬脂酸酯聚氧乙烯醚(Tween-60)为混合表面活性剂溶于正丁醇 - 异辛烷中构成反胶团系统，萃取纯化α- 淀粉酶 食品科学 2011, 32(21): 214-217 反胶束萃取的应用实例 混合反胶团萃取α-淀粉酶 以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)和脱水山梨醇单硬脂酸酯聚氧乙烯醚(Tween-60)为混合表面活性剂溶于正丁醇 - 异辛烷中构成反胶团系统，萃取纯化α- 淀粉酶 食品科学 2011, 32(21): 214-217 反胶束萃取的应用实例 反萃取技术对脂肪酶的高效纯化 Ef?cient lipase puri?cation using reverse micellar extraction 目标函数：纯化度，回收率 变量：表面活性剂的类型和浓度，pH，离子强度，有机相/水相比例 原始脂肪酶培养基pH对回收率和纯化度的影响 盐浓度对回收率和纯化度的影响 Bioresource Technology, 2012, 108:224–230 反胶束萃取的应用实例 反萃取技术对脂肪酶的高效纯化 Ef?cient lipase puri?cation using reverse micellar extraction 目标函数：纯化度，回收率 变量：表面活性剂的类型和浓度，pH，离子强度，有机相/水相比例 加入15%异丙醇后，不同浓度NaCl对回收率和纯化度的影