免疫捕捉PCR法检测西瓜种子带细菌性果斑病菌.pdfVIP

维普资讯 果 树 学 报 2008，25(2)：215-218 JournalofFruitScience 免疫捕捉PCR法检测西瓜种子带细菌性果斑病菌 徐福寿 ，王 笑 ，谢关林 ，苏 婷 ，余 山红 1浙江省杭州市植保土肥总站 ，杭州 310020； 浙江大学生物技术研究所 ．杭州 3100291 摘 要 ：为提高免疫捕捉 PCR法检测瓜种携带西瓜细菌性果斑病菌 的灵敏度并明确浙江省主要市售西瓜种子的带 菌情况 ，以有效阻止该检疫性病害 的扩散和蔓延 。利用 5种缓冲液配制浸提液并用免疫捕捉 PCR法对 国内市售 的 23批瓜种的l8个品种进行了实际检测。结果表明，3一N一吗啡啉乙磺酸(MOPS)缓冲液最适宜于作少量瓜种的免疫捕 捉 PCR法检测的浸提液 ，来 自病 区的浙蜜 4号 、早佳 84—24和寿 山王 3个 品种 的种子检测到西瓜果斑病菌 ．病菌主 要附着在种皮上。有效阻止病区种子流入无病 区及防治病种交互感染健种是该病检疫 的关键 关键词 ：西瓜 ；细菌性果斑病 ：种子 ：免疫捕捉 PCR：检测 中图分类号：$65l 文献标识码 ：A 文章编号：1009—9980(2008)02—215—04 Detection ofAcidovoraxavenaesubsp．citrullifrom seedsofwatermelon byImmuno——capturePCR XUFu-shou，WANGXiao2,XIEGuan-lin妒，SUTing2,YUShan-hong (IHangzhouPlantProtectionStation,Hangzhou，Zhejiwtg310020China；2InstituteofBiotechnology，ZhejiangUniversity，Hangzhou，Zhe- jicmg310029China) Abstract：Animmuno—capturepolymerasechainreaction(IC-PCR)methodforaccurateandsensitivedetectionofAcidovo— raxo~enot?subsp．citrulli(Aac)hasbeenusedtodetemrineseedbornestatueofmelonseedscollectedfromZhejiangmarkets inordertopreventdispersalandinfectionofthisquarantinepathogeninChina．23batchesof18commercialmeloncuhivars seedsweredetectedbythismethodwith5extractingsolutions、Theresultshowed3-IN-Morpholino1]-Ethanesulfonicacid (MOPS)solutionwasthebestonefordetectingtheseedscarryingAcidovoraxo1)eno~subsp．citulti，whichappearedonthe seedsofcuhivarZhemi一4，Zaojia84—24andShoushanwang，whichweregrowninthemelonbacterialfruitblotchinfectedar— eas．Thepathogenwasmainlycolonizedonseedcoat．It’Sthekeypointinplantquarantinetopreventthediseasedseeds flowingintodiseaserfeeareasandcontaminationofdiseaserfeeseeds． Keywords：Watermelon；Bacterialfruitblotch；Seed；Immuno—capturePCR；Detection 由噬酸菌属燕麦种西瓜亚种 (Acidovoraxavenae 准确 、灵敏 、快速、成本低等优点。我们在该方法的基 subsp．citrulli)引起的西瓜细菌性果斑病